[發明專利]一種采用安培免疫傳感器進行夾心免疫反應的二抗探針

有效

• 申請號: 201110174132.2
• 申請日: 2011-06-25
• 公開（公告）號: CN102253194A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 鄭磊;賈立永;干寧;王前;李博;巫遠招
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N27/60
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

1.一種采用安培免疫傳感器進行夾心免疫反應的二抗探針，該探針由小牛胸腺DNA分子鏈和附著在小牛胸腺DNA分子鏈上的納米球構成，其中所述的納米球的表面為酶標記的抗體蛋白，內部為磁性納米顆粒，該顆粒為在四氧化三鐵納米顆粒表面沉積一層無定形氧化鋯形成。

2.權利要求1所述的二抗探針的制備方法，該方法由以下步驟組成：

1)將磁性納米顆粒加入pH?7.0磷酸鹽緩沖液中，再加入重量為磁性納米粒子0.1倍的辣根過氧化物酶標記抗體，4℃下反應6h，分離得到負載抗體的納米微球；

2)將所得到的納米微球加入pH?7.0磷酸鹽緩沖液中，再加入重量為所述納米微球0.1倍的過氧化物酶和重量為所述納米微球1.0倍的牛血清白蛋白，4℃下反應6h，分離得到納米球；

3)將納米球加入pH?7.0磷酸鹽緩沖液中，再加入重量為納米球1.2倍的小牛胸腺DNA，室溫下反應6h，分離得到二抗探針。

3.一種采用權利要求1所述的二抗探針測量抗原濃度的方法，該方法由以下步驟組成：

(a)定量標準曲線的制備：

(1)配制一系列不同濃度的抗原標準品溶液；

(2)按相同的體積分別將每一濃度的抗原標準品溶液加入到安培免疫傳感器的反應腔中，先37℃溫育30min；再將所制備的二抗探針滴加在安培免疫傳感器的工作電極表面，37℃溫育30min；然后，反應腔中加入含有濃度為5mmol/L過氧化尿溶液和1mmol/L鄰苯二酚的0.1mol/L磷酸鹽緩沖溶液，反應3min后，在電化學工作站上用循環伏安法(CV)或者示差脈沖伏安法(DPV)記錄還原峰電流；

(3)將步驟(2)所得到的抗原標準品溶液的濃度及其對應的還原峰電流的一組數據，以還原峰電流對抗原標準品溶液濃度進行線性回歸便得到，還原峰電流與抗原標準品溶液濃度對應關系的直線方程，即標準曲線；

(b)樣品的檢測：

將待測樣品加入到安培免疫傳感器的反應腔中，以步驟(a)同樣的方法和反應條件采用循環伏安法(CV)記錄還原峰電流，然后，將檢測樣品得到的還原峰電流值代入步驟(a)所得到的直線方程中即可算出待測樣品中抗原的濃度。