[發(fā)明專利]不含明膠、人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110172595.5
• 申請(qǐng)日: 2011-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102228687A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳念良;毛江森;黃衛(wèi)新;忻亞娟;陳悅青;毛子安;張鋒;莊昉成;錢(qián)汶;陳卓;朱蓮;沈立軍;唐彩華;吳海光;陳軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江普康生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/29
• 分類號(hào): A61K39/29;A61K47/36;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 高麗敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域,特別是用于預(yù)防甲型肝炎的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

甲型肝炎作為我國(guó)重要的傳染病之一，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活條件的改善，以及近十幾年來(lái)國(guó)內(nèi)自制甲肝疫苗的推廣應(yīng)用，該病的發(fā)病率平均每年已20%明顯下降。然而一些中西部地區(qū)，甲肝發(fā)病率仍居高不下。即使在東部一些發(fā)達(dá)省份，甲肝爆發(fā)亦時(shí)有發(fā)生。

隨著國(guó)家對(duì)“民生”問(wèn)題的日益關(guān)注，?2007年3月，溫家寶總理在第十屆全國(guó)人民代表大會(huì)第五次會(huì)議上，將甲型肝炎等15種可以通過(guò)接種疫苗有效預(yù)防的傳染病全部納入國(guó)家計(jì)劃免疫，對(duì)疫苗實(shí)行批簽發(fā)管理制度；在國(guó)際市場(chǎng)，甲肝疫苗作為我國(guó)第一個(gè)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、通過(guò)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)論證的生物制品，已出口印度、危地馬拉、菲律賓等國(guó)家,在很多發(fā)展中國(guó)家甲肝仍未得到控制的大環(huán)境下，我國(guó)的甲肝疫苗出口還面臨著一個(gè)巨大的、可拓展的國(guó)際市場(chǎng)空間，對(duì)疫苗生產(chǎn)的產(chǎn)量和質(zhì)量提出了更高的要求。

近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，人們對(duì)凍干制品，凍干保護(hù)劑及其保護(hù)機(jī)理的研究更加深入。開(kāi)發(fā)更優(yōu)越的凍干保護(hù)劑、提高凍干制品的質(zhì)量，仍是現(xiàn)今生物技術(shù)研究的方向。國(guó)家藥典會(huì)病毒類制品專業(yè)委員會(huì)也在2007年7月17日至7月19日北京會(huì)議紀(jì)要中明確要求，“作為穩(wěn)定劑成分的明膠注射到人體后可發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進(jìn)行取代明膠成分的相關(guān)研究工作，以進(jìn)一步提高制品的安全性”。傳統(tǒng)的凍干保護(hù)劑配方中往往含有明膠或人血白蛋白，但由于國(guó)產(chǎn)明膠內(nèi)毒素含量偏高，而進(jìn)口明膠有攜帶瘋牛病病毒的潛在危險(xiǎn)，人血白蛋白易發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，針對(duì)這一問(wèn)題，需研究一系列明膠的替代

品來(lái)改進(jìn)傳統(tǒng)的配方，目前，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是研究不含明膠、不含人血白蛋白的凍干甲型肝炎減毒活疫苗的新一代保護(hù)劑，使內(nèi)毒素含量下降，不易發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，并能工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。

本發(fā)明經(jīng)過(guò)多年研究，對(duì)各種配方的保護(hù)劑的研究情況，選定不含明膠、不含人血白蛋白的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的保護(hù)劑，簡(jiǎn)稱（16-3）為最佳配方，用于冷凍干燥甲肝疫苗的生產(chǎn)。

該保護(hù)劑含有海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷。將此配方的保護(hù)劑與甲肝疫苗原液混合，配制成半成品，進(jìn)行分裝、凍干，對(duì)凍干前后疫苗的病毒感染性滴度及凍干后的熱穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并與原含明膠的生產(chǎn)配方相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該保護(hù)劑的保護(hù)作用很好，凍干過(guò)程中疫苗病毒的感染性滴度下降幅度明顯減少，成品的內(nèi)毒素含量則明顯下降（低于0.25EU/ml），用此配方生產(chǎn)的凍干疫苗接種人體，結(jié)果表明疫苗的免疫效果和安全性良好。

本發(fā)明由甲肝病毒和冷凍干燥保護(hù)劑組成，保護(hù)劑（16-3）由海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷組成。

不含明膠、不含人血白蛋白的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的保護(hù)劑簡(jiǎn)稱（16-3）配方組份為：海藻糖4-12克%、右旋糖酐40?0.6-1.8克%、L-半胱氨酸0.1-0.5克%、精氨酸0.2-0.8克%、谷氨酸0.4-1.0克%、甘氨酸0.5-2.0克%、氯化鎂0.1-0.5克%、硫酸鎂0.1-0.5克、山梨醇1-4克%、甘露醇1-4克%、三羥甲基氨基甲烷適量。

不含明膠、人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法：每1000毫升加入海藻糖40-120克、右旋糖酐40??6-18克、L-半胱氨酸1-5克、精氨酸2-8克、谷氨酸4-10克、甘氨酸5-20克、氯化鎂1-5克、硫酸鎂1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羥甲基氨基甲烷適量。溶解后除菌過(guò)濾，將甲肝疫苗原液按每人份接種病毒量7.00-7.38lgCCID₅₀/ml比例混合，配制成半成品，進(jìn)行灌裝,采用冷凍干燥，冷凍干燥箱預(yù)冷-20℃～-50℃的溫度3-5小時(shí)，凍干箱擱板溫度-35℃～-50℃，開(kāi)真空、升華，二次凍干箱擱板溫度15℃～30℃，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。

具體步驟如下：

1.提供甲型肝炎病毒活病毒原液。