[發明專利]Her2-neu抗原陽性腫瘤治療性疫苗的制備及應用

在審

• 申請號: 201110172525.X
• 申請日: 2011-06-23
• 公開（公告）號: CN102838679A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 吳艷峰;萬濤;曹雪濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/0784;C12P21/02;A61K39/00;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

技術領域

本發明涉及生物學和醫學領域，更具體地，本發明涉及一種Her2-neu抗原陽性腫瘤治療性疫苗的制備及應用，所述的融合蛋白包括熱休克蛋白與Her2-neu腫瘤抗原。

背景技術

HER2/neu是人類腫瘤常發生改變的一個癌基因，與腫瘤的發生、發展密切相關，是表皮生長因子受體(Epidermal?growth-factor?receptor，EGFR)家族的第二位成員。表皮生長因子受體家族，也稱為HER或ErbB2家族，在細胞信號轉導中發揮重要作用，是細胞生長、分化及存活的重要調節因子。

人HER2/neu基因定位于17號染色體短臂，表達產物為分子量185KDa的單鏈跨膜糖蛋白，即p185。p185含有1255個氨基酸殘基，細胞內段具有酪氨酸激酶活性，是一種酪氨酸激酶受體。人HER2/neu蛋白由三部分組成：細胞外區(extracellular?domain，ECD)、跨膜區和細胞內區(intracellular?domain，ICD)。HER2/neu的ECD包括4個亞結構域，亞結構域I和III是配體結合域，介導受體配體結合；亞結構域II和IV，富含半胱氨酸，在形成受體二聚體過程中起著重要作用。

HER2/neu胞內信號途徑主要有2條，分別為絲裂原活化蛋白激酶(Ras-mitogen?activated?protein?kinase，Ras/MAPK)、磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3-kinasee/protein?kinase?B，PI3K/AKT)。一般認為，HER2/neu的ECD與配體結合后，引發受體變構，導致其與相同的或其他EGFR家族成員形成同、異二聚體，隨后受配體被內吞并激活蛋白酪氨酸激酶(protein?tyrosine?kinase，PTK)，可使細胞膜內側的PTK活性顯著增加最終使癌細胞核內早期反應基因如原癌基因fos和jun等轉錄水平增加，促進有絲分裂等，從而能夠促進腫瘤形成、進展。而且，HER2/neu的過度表達能引起HER2/neu同二聚體的激活而無需配體的結合，從而引起不受控制的細胞生長和癌基因的轉化，因此，HER2/neu全蛋白或含有胞內段結構的片段應用于腫瘤疫苗中具有致瘤性和導致細胞不受控制的過度轉化的潛在風險。此外，HER2/neu蛋白主要在胚胎期的組織或器官中表達，而在成年組織或器官極少表達，因而機體免疫系統往往不能有效識別而導致免疫耐受。

人類的多種腫瘤組織均存在HER2/neu過度表達，如乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、原發性腎細胞癌、胃癌、結直腸癌等。目前，手術、化療、放療等傳統療法對于早期HER2/neu陽性腫瘤具有一定的療效，但一方面化療、放療具有較大的副作用，另一方面由于許多腫瘤發現較晚，往往失去手術治療的最佳機會，所以通過增強機體免疫系統的抗腫瘤作用殺滅腫瘤細胞、達到治療腫瘤目的的免疫與基因療法作為腫瘤治療的一種新模式，成為腫瘤治療和免疫學研究的熱點。

目前對于HER2/neu陽性腫瘤已有多種免疫和基因治療方案，如單克隆抗體、構建HER2/neu重組病毒疫苗、核酸疫苗、細胞因子的應用等。隨著HER2/neu氨基酸序列中T細胞表位被發現，并證實其可以在體外誘導出特異性的細胞免疫應答，以這些表位肽為基礎的腫瘤疫苗受到了研究者的關注，Disis采用完整P185蛋白不能有效誘導免疫應答，Georg采用HLA-A*0201限制性的九肽表位E75(Her2_369-377)作為多肽疫苗可促發淋巴結陽性乳腺癌(NPBC)接受過治療的某些無疾病患者的特異性免疫反應，然而，目前尚沒有取得令人滿意的免疫效果。因此選擇適當的HER2/neu原癌基因片段區域是關鍵點，該片段既能夠暴露某些表位而誘導免疫應答，又能夠避免全長基因表達產物帶來潛在轉化危險。