[發明專利]利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法

有效

• 申請號: 201110171900.9
• 申請日: 2011-06-23
• 公開（公告）號: CN102250989A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 鄭惠華;匡群;孫梅;張一平;華洵璐;何寅琛;葉進;諸建國
• 申請（專利權）人: 江蘇安惠生物科技有限公司;江蘇省蘇微微生物研究有限公司
• 主分類號: C12P19/40
• 分類號: C12P19/40;C12R1/125
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

1.?一種利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法，其特征是：依次包括下列步驟：

（1）菌體活化

將枯草芽孢桿菌CGMCC?No.4587劃線接種于營養肉湯瓊脂試管斜面，然后劃線轉接于瓊脂茄子瓶斜面培養成熟，準備移種；

（2）種子培養

將茄子瓶斜面上的成熟菌泥制備均勻的菌懸液，將菌懸液按1-10%的接種量接入種子罐進行種子培養；

或直接挑取一環活化后的試管斜面菌體，接種于三角瓶，搖瓶培養；

（3）發酵培養

種子培養液接入三角瓶，搖瓶培養；或接入發酵罐進行發酵罐培養；

（4）鳥苷提取

鳥苷發酵液經過濾、濃縮、冷凍結晶得到鳥苷粗品。

2.?根據權利要求1所述的利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法，其特征是：鳥苷粗品經精制得到鳥苷精品。

3.?根據權利要求1或2所述的利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法，其特征是：步驟（1）中營養肉湯瓊脂試管斜面培養時的培養基和瓊脂茄子瓶斜面培養時的培養基均為：葡萄糖5g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl?5g/L、瓊脂?20g/L，pH?7.0-7.2，培養溫度均勻32℃，培養時間均為24-48小時。

4.?根據權利要求1或2所述的利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法，其特征是：步驟（2）種子培養時的培養基為：葡萄糖10g/L、酵母膏5g/L、蛋白胨5g/L、牛肉膏5g/L；氯化鈉2g/L、RNA0.25g/L，pH?7.0-7.2；搖瓶培養時培養條件為：往復式搖床、振幅7cm，頻率108轉/分、34℃、10-18小時；種子罐培養時的培養條件為：種子罐攪拌轉速150-180轉/分、通氣量1-2m³/小時、溫度34℃、10-15小時。

5.?根據權利要求1或2所述的利用芽孢桿菌發酵生產鳥苷的方法，其特征是：步驟（3）發酵培養時，培養基組成為：葡萄糖100g/L、酵母膏4?g/L、玉米漿4?g/L、K₂HPO₄?2?g/L、MgSO₄?0.5?g/L、MnCl₂?0.01?g/L、FeSO₄?0.01?g/L、KCl?2?g/L、CaCO₃?20?g/L、NH₄Cl?20?g/L，pH7.0-?7.2；搖瓶培養的培養條件為：往復式搖床、振幅7cm，頻率108轉/分、36℃、72小時；發酵罐培養的培養條件為：發酵罐攪拌轉速100-150轉/分、通氣量1-2m³/小時、36℃、60-72小時；發酵培養時加入生長因子原料-RNA，搖瓶發酵培養時RNA的添加量為一次性添加相當于培養液總重量的0.3%，發酵罐培養時RNA的添加總量為相當于培養液總重量的0.3%，發酵0小時添加0.03%，其余0.27%在設定K值后，按F(t)=F(0)×e^(kt)計算出每小時添加的量進行添加，其中的第一次添加時間控制在整個發酵過程中菌體生長OD₆₆₀為最高數的1/5時添加，以后每小時添加一次，直至添加完畢；發酵罐培養過程中加入起消泡作用的豆油或泡敵。