[發明專利]逆轉或降低食管癌放療抗性的增敏劑、篩選方法及其用途

無效

• 申請號: 201110169897.7
• 申請日: 2011-06-23
• 公開（公告）號: CN102836433A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 周德敏;高獻書;熊偉;趙靜;張禮和
• 申請（專利權）人: 北京大學;北京大學第一醫院
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K49/00;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N33/15;A61P37/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李英

發明領域

本發明涉及生物技術和免疫治療領域，具體而言涉及逆轉或降低食管癌放療抗性的增敏劑、篩選方法及其用途。進一步地，涉及對食管癌放療抗性基因的基因沉默劑、沉默方法及其用途。本發明通過對選擇的特定抗性基因的沉默，能夠有效地實現放療的增敏效果，進而能夠更好地進行個體化治療，為食管癌的治療提供更有效的治療方案。?

背景技術

食管癌是常見的惡性腫瘤，在全世界是第六位癌癥相關的死亡原因[Enzinger?PC&Mayer?RJ.Esophageal?cancer.N?Engl?J?Med?2003；349：2241?2252]。已知放射治療是食管癌的主要治療手段之一，但局部失敗率高達50％-55％，即使增加放療或化療劑量仍然不能改善局控率[Cooper?J等人，Radiation?Therapy?Oncology?Group?for?the?Chemoradiotherapy?of?locally?advanced?esophageal?cancer：Long-term?follow-up?of?a?prospective?randomized?trial?(RTOG85-01).JAMA?1999；281：16231627；Minsky?B等人，INT?0123(Radiation?Therapy?Oncology?Group?94-05)phase?III?trial?of?combinedmodality?therapy?for?esophageal?cancer：High-dose?versus?standard-dose?radiation?therapy.J?Clin?Oncol?2002；20：11671174]。?

目前研究發現放療局部失敗除了與腫瘤乏氧、劑量限制性毒性降低照射量等因素有關外，與放射抵抗密切相關。可以說放射抵抗是放療后局部復發的主要原因。體內食管癌瘤中某些基因的表達狀態直接影響著癌細胞的放射抗性[K?Fukuda等人，Differential?gene?expression?profiles?of?radioresistant?oesophageal?cancer?cell?lines??established?by?continuous?fractionated?irradiation.British?Journal?of?cancer，2004；91(8)：1543-1550]。?

對局部失敗率高達50％-55％的這部分患者人群，有必要尋找與食管癌的放療抗性相關基因，并以之為靶點獲得能夠增敏放療抗性基因的增敏劑，借助這種篩選抑制或者消除放療抗性，進而為這部分食管癌患者提供個體化治療，提高患者的生存率。?

發明內容

為了實現上述發明目的，發明人進行了多方面的研究工作，先在抗性敏感基因搜索方面進行了大量工作。?

主要包括：應用包含48000個探針的Illumine-6_V3人類全基因組芯片，對比調查了經多次照射產生放射抵抗性的食管癌細胞系KYSE-170R及其親代細胞系KYSE-170的基因表達譜差異。由qRT-PCR和Western?blot證實該基因確實存在差異表達。應用慢病毒介導的RNA干擾體系在體內外驗證差異基因與放射抵抗的關系，并對該基因在食管癌患者病理組織中的表達情況進行回顧性分析。?

試驗結果表明食管癌細胞系KYSE-170R及其親代細胞系KYSE-170的基因在未照射、照射后8小時及照射后24小時分別有945，733和1232個表達差異基因。qRT-PCR結果提示相對于親代細胞系KYSE-170，放射抵抗細胞系KYSE-170R在未照射、照射后8小時及照射后24小時AKR1C3分別有9.39，5.94和9.20倍的表達上調。Western?blot結果證實，在未照射的放射抵抗細胞系KYSE-170R中AKR1C3蛋白表達量顯著高于親代細胞系KYSE-170(P＜0.05)。應用慢病毒介導的RNA干擾體系沉默AKR1C3后，放射抵抗細胞系KYSE-170R的放射敏感性顯著增強，應用AKR1C3過表達質粒轉導親代細胞系KYSE-170發現其放射抵抗性顯著增強。機制探討初步結果提示，AKR1C3沉默引起的放射敏感性增強，很可能與ROS晚聚集和放療后48小時內G2期細胞阻滯有關。?