[發明專利]肝細胞大規模培養和凍存的裝置

無效

• 申請號: 201110168648.6
• 申請日: 2011-06-22
• 公開（公告）號: CN102250766A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 杭化蓮;卞建民;禹亞彬
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學附屬南京第一醫院
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;A01N1/02
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 周新亞

技術領域

本發明涉及一種裝置，特別是一種主要用于進行肝細胞大規模培養和冷凍的裝置，屬于專用于醫學目的的容器。

背景技術

慢性肝炎肝硬化、中晚期肝癌的病人常常死于終末期肝功能衰竭，應用生物人工肝以及肝臟移植等療法來治療肝臟衰竭最近幾年來取得了顯著的成就。生物人工肝支持系統借助體外循環裝置清除體內各種有害物質并且補充體內必需的蛋白質和凝血因子，為患者提供短暫的肝功能支持；肝移植療法則是借助同種或異種肝臟移植到患者體內發揮功能來達到治療目的。但上述兩種治療方法都面臨著缺乏理想肝細胞源的問題，而且并不是每次獲取的肝細胞量都能達到治療的要求，因此探索一種符合實際情況的肝細胞大規模培養、凍存及復蘇方法是提高肝衰患者治療效果的重要前提。

目前細胞的大規模培養常使用生物反應器，常見的有攪拌式、旋轉式、灌注式等。但生物反應器構造復雜、價格昂貴、使用不方便等缺點使其在生物醫學領域應用發展緩慢。

在本發明之前，常規使用的細胞冷凍降溫方法大致分為三種：常規冷凍、程序降溫儀冷凍、冷凍盒冷凍。其中使用常規方法（即：4℃放置30min，-20℃冷凍30min，最后-80℃過夜，次日投液氮）對原代肝細胞冷凍效果較差；而采用計算機程序降溫儀冷凍操作復雜、費時、費力；采用冷凍盒進行冷凍操作簡便、經濟、省時，冷凍效果與前者相近。上述幾種冷凍方法均是將細胞混于冷凍保護液并置于冷凍小管中冷凍保存，這種方法對一般分裂傳代細胞進行少量冷凍，效果較好且方便，細胞復蘇后可傳代培養并用于細胞學或分子生物學研究，但針對以治療為目的的肝細胞卻存在一定缺陷。首先，肝細胞用來治療所需量大，常規采用冷凍管冷凍的方法數量少、操作過程繁瑣，無法達到大規模冷凍的要求；其次，常規采用冷凍方法無法滿足一次性急需大量肝細胞的需求，更不能達到成品化輸出的目的。

發明內容

本發明的目的就在于克服上述現有裝置的不足之處，為滿足肝衰患者急需大量肝細胞的要求，提供一種可作為人工肝直接用于治療或為肝衰患者提供大量肝細胞的醫院使用的結構簡單合理，操作使用簡單方便的肝細胞大規模培養和冷凍的裝置。

本發明的肝細胞大規模培養和冷凍的裝置，主要由培養盒和冷凍盒組成，所述培養盒包括盒體、至少2層平板、殼聚糖納米纖維膜、平板小孔、上塞蓋、支架管、支架側孔和下塞蓋，其中，支架管裝在盒體的上口與下口之間，平板經中心孔分別安裝在支架管上，殼聚糖納米纖維膜貼在平板上，平板小孔分布在平板上，支架側孔分布在支架管壁上，上塞蓋和下塞蓋分別裝在盒體的上口與下口上；所述冷凍盒包括冷凍盒體、冷凍劑和冷凍盒蓋，冷凍劑裝在冷凍盒體內，冷凍盒蓋蓋裝在冷凍盒體的盒口上；所述培養盒置于冷凍盒內的冷凍液中。

為了便于將裝有培養盒的冷凍盒吊于液氮罐中冷凍，可在冷凍盒蓋上設有吊耳和吊繩，吊耳安裝在冷凍盒蓋上，吊繩系扣在吊耳上，為了提高密封性能，可在冷凍盒蓋與冷凍盒體之間裝有耐低溫密封圈。

上述培養盒體選用耐低溫的PIR聚異氰脲酸酯泡沫盒，冷凍液選用異丙醇或丙二醇，耐低溫密封圈選用硅橡膠密封圈。

本發明的優點和效果在于：能將一次分離所獲肝細胞按要求直接接種于培養盒中的殼聚糖多層平板上進行擴增，實現大規模培養，大幅度減少了每次分離肝細胞的浪費，而且培養盒直接放入盛有異丙醇或丙二醇的冷凍盒中凍存，培養盒內的多層平板表面上的殼聚糖納米纖維充分模擬體內微環境能促進肝細胞粘附，并能提高解凍后肝細胞的細胞活力和功能，解決了常規冷凍肝細胞裝置使細胞貼壁不穩定而容易脫落和難以提供大量肝細胞等問題。還具有結構設計合理，操作使用簡單方便易行等優點，可作為人工肝直接用于治療或為肝衰患者提供大量肝細胞的醫院使用。

附圖說明

圖1是本發明的一種結構示意圖；

圖2是本發明的另一種結構示意圖。

具體實施方式

參見附圖1和2，本發明的肝細胞大規模培養和冷凍的裝置，主要由培養盒和冷凍盒組成，所述培養盒包括盒體1、至少2層平板2、殼聚糖納米纖維膜3、平板小孔4、上塞蓋5、支架管6、支架側孔7和下塞蓋8，其中，支架管6裝在盒體1的上口與下口之間，平板2經中心孔分別安裝在支架管6上，殼聚糖納米纖維膜3貼在平板2上，平板小孔4分布在平板2上，支架側孔7分布在支架管6壁上，上塞蓋5和下塞蓋8分別裝在盒體1的上口與下口上；所述冷凍盒包括冷凍盒體11、冷凍劑10和冷凍盒蓋9，冷凍劑10裝在冷凍盒體11內，冷凍盒蓋9蓋裝在冷凍盒體11的盒口上；所述培養盒置于冷凍盒內的冷凍液中。