[發明專利]碳酰肼的藥物用途

無效

• 申請號: 201110168313.4
• 申請日: 2011-06-18
• 公開（公告）號: CN102274225A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 張尚立;張恒;常宏文;馬劍峰;王麗;王萍
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K31/4439
• 分類號: A61K31/4439;A61P9/00;A61P9/14
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

技術領域

本發明涉及吡唑酰腙衍生物在抑制血管內皮細胞衰老和凋亡中的應用；尤其涉及(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼在制備抑制血管內皮細胞衰老和凋亡藥物中的應用。?

背景技術

(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼結構式如下：?

分子式：C₂₄H₂₀ClN₅O₃

分子量：461.90?

性狀：黃色固體。?

目前，有關吡唑酰腙衍生物鮮有報道，尤其未見(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼在血管內皮細胞衰老及凋亡方面的作用以及相關的藥理學的研究與應用的報道。?

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是提供一種(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼在制備抑制血管內皮細胞衰老和凋亡藥物中的應用。?

本發明所述的(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼在制備抑制血管內皮細胞衰老和凋亡藥物中的應用；其中：能有效抑制凋亡、核片段化和DNA凝縮的(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的濃度是40～80mg/L。?

本發明的(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼在抑制血管內皮細胞衰老和凋亡中具有明顯作用，為新型心血管藥物的開發提供了誘人前景。?

為了更好地理解本發明的實質及本發明所述化合物的作用效果，下面結合(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的藥理實驗及結果，來進一步闡述其在抑制血管內皮細胞衰老和凋亡中的作用。?

血管內皮細胞的制備：以常規方法培養血管內皮細胞，選取生長狀態良好的、且處?于對數生長期的血管內皮細胞，備用。?

觀察(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼對抑制去除血清和生長因子的血管內皮細胞衰老和凋亡的影響。?

1、顯微鏡觀察細胞形態學變化：?

將所培養的細胞分為正常組細胞、對照組細胞和處理組細胞。?

正常組細胞用含有血清和生長因子的M199培養液培養；對照組細胞去處血清和生長因子培養；處理組是將血管內皮細胞去除血清和生長因子后，分別加(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，處理24小時和48小時。然后，光鏡下直接觀察血管內皮細胞凋亡的形態學變化和凋亡小體的形成。?

結果發現：(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼處理血管內皮細胞24和48小時，較之對照組可明顯抑制凋亡小體的形成以及凋亡的形態學變化(見圖1)。?

2、熒光顯微鏡觀察細胞核凝縮及核碎裂情況：?

將所培養的細胞分為正常組細胞、對照組細胞和處理組細胞。?

正常組細胞用含有血清和生長因子的M199培養液培養；對照組細胞去處血清和生長因子培養；處理組是將血管內皮細胞去除血清和生長因子后，加(E)-N-(2-羥基苯亞甲基)-1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼處理24小時。然后對各組進行AO染色，在熒光顯微鏡下觀察血管內皮細胞凋亡時，細胞核DNA的凝縮及核碎裂情況。?

結果顯示：處理組中細胞核DNA凝縮及碎裂較對照組減少(見圖2)。?

3、用MTT法檢測細胞琥珀酸脫氫酶的活性，以判斷血管內皮細胞生長情況：?