[發(fā)明專利]羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110168298.3
• 申請日: 2011-06-17
• 公開（公告）號: CN102274210A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董玫;史清文;叢斌;倪志宇
• 申請（專利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61K31/365
• 分類號: A61K31/365;A61P35/00
• 代理公司: 石家莊國域?qū)＠虡耸聞?wù)所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種化合物的醫(yī)藥用途，具體地說是一種倍半萜內(nèi)酯類化合物的醫(yī)藥用途。

技術(shù)背景

羊耳菊又名白牛膽、山白芷、見消腫、為南方民間草藥，其地上部分和根部入藥，具有除痰定喘、活血調(diào)經(jīng)及治跌打損傷等作用。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，羊耳菊是傣醫(yī)名方“雅叫哈頓散”中的主藥之一，臨床上用于治療感冒發(fā)燒、喉炎、咳嗽咳血、虛癆、心悸、月經(jīng)不調(diào)及產(chǎn)后流血等癥。羊耳菊中的常見化學(xué)成分有倍半萜內(nèi)酯、三萜、甾醇、蒽醌、黃酮、芳香化合物及酰胺類化合物。羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B(即Ineupatorolide?B)就是從菊科旋覆花屬羊耳菊(Inula?cappa)花中的提取的一種倍半萜內(nèi)酯類化合物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是要提供羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B的一種新的醫(yī)藥用途。

本發(fā)明所提供的羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B的醫(yī)藥用途是羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B在制備抗人體子宮頸腫瘤藥物中的應(yīng)用；羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B在制備抑制人體小細胞肺瘤細胞增殖藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：

其化學(xué)名稱為2-丁烯酸-(2Z)-2-甲基-(3αS，6R，10S，11R，11αS)-十二氫-10-羥基-6，10-二甲基-3-烯甲基-2，5-二氧癸環(huán)[β]呋喃-11-基酯)；拉丁名為Ineupatorolide?B。

該化合物的波譜數(shù)據(jù)為：¹H-NMRδppm：1.11(3H，d，J＝6.80Hz)，1.16(3H，s)，1.93(3H，s)，1.96(3H，dq，J＝7.20，J＝1.30Hz)；6.38(1H，d，J＝2.30Hz)，5.77(1H，d，J＝1.90Hz)，6.14(1H，dq，J＝7.20，J＝1.30Hz)，4.75(1H，d，J＝6.40Hz)，4.56(1H，dd，J＝6.30，J＝2.70Hz)，3.65(1H，br.d，J＝11.30Hz)。¹³C-NMRδppm：214.7，168.8，167.5，123.6，126.7，137.8，140.2，73.4，76.5，77.5。

該化合物可以通過以下方法獲得：

(a)以菊科旋覆花屬植物菊科羊耳草的花為原料，用90--99％的乙醇連續(xù)回流提取，趁熱過濾，濾液減壓濃縮得浸膏；

(b)將浸膏懸浮在水中，用石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液，并用無水Na₂SO₄脫水后減壓濃縮至近干，分別得石油醚提取物；

(c)石油醚提取物溶于二氯甲烷后，采用硅膠柱色譜進行分離，石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫(40∶1到1∶1)，最后用乙醇沖柱至洗脫完全，洗脫液按體積接收，每份500mL，減壓濃縮各流份，采用薄層色譜進行檢測，按照薄層色譜結(jié)果將相同流份進行合并，在19-26流份得羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B。

本發(fā)明人經(jīng)過長期大量的研究發(fā)現(xiàn)了羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B的新的藥理活性，從而發(fā)明了羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。

本發(fā)明所述羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B的新的藥理活性通過以下試驗得到了驗證。

試驗用細胞株：

HeLa：人子宮頸癌細胞株；HOC-21：人卵巢透明癌細胞株；T-98和U251-SP：人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株；A549，PC-6和QG-56：人肺癌細胞株；HLE：人肝癌細胞株；MM1-CB和HMV-1：人黑色素瘤細胞株；KT：人乳腺癌腦轉(zhuǎn)移細胞株。

羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B抑制腫瘤細胞增殖活性試驗：

實驗方法：細胞增殖實驗法。

在含有20％胎牛血清的D-MEM/hams培養(yǎng)基中，將被試細胞調(diào)成密度為2×10⁵細胞/mL。將上述腫瘤細胞株懸液接種于96孔培養(yǎng)板，每孔50μL，分別加入空白對照磷酸鹽緩沖液(PBS)、溶劑對照0.1％二甲基亞砜、陽性對照順鉑(DDP)以及不同濃度羊耳菊倍半萜內(nèi)酯B各50μL，每組均設(shè)3個復(fù)孔。置于飽和濕度、37℃和5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，于培養(yǎng)結(jié)束前4小時，各培養(yǎng)孔加入5mg/mL四氮唑鹽(MTT)10μL，培養(yǎng)結(jié)束后，棄去培養(yǎng)上清，懸浮細胞需離心后棄去上清，每孔加入反應(yīng)停止液150μL，靜置1小時，用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測各孔吸光度(OD)值，測定波長λ＝570nm，參考波長λ＝630nm，并計算腫瘤細胞生存率。

本發(fā)明化合物溶解于DMSO，添加后的最終濃度在0.1％以下。以只添加DMSO的培養(yǎng)基作為對照。