[發明專利]一種無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器及其制備方法

無效

• 申請號: 201110167679.X
• 申請日: 2011-06-21
• 公開（公告）號: CN102243231A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 張巖;魏少紅;朱泮民;李曉燕;胡紅偉;許軍輝;袁英賢
• 申請（專利權）人: 河南城建學院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 陳浩

1.一種無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器，其特征在于，由玻碳電極和設置在玻碳電極外表面的膜層組構成，所述膜層組由普魯士藍膜層、第一納米金膜層、L-半胱氨酸膜層、第二納米金膜層和苯并（a）芘抗體膜層組成，所述普魯士藍膜層與玻碳電極相鄰設置，普魯士藍膜層上依次設置有第一納米金膜層、L-半胱氨酸膜層、第二納米金膜層和苯并（a）芘抗體膜層，該無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器的結構為：玻碳電極/普魯士藍膜層/第一納米金膜層/L-半胱氨酸膜層/第二納米金膜層/苯并（a）芘抗體膜層。

2.一種權利要求1所述的無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）玻碳電極的預處理

玻碳電極經打磨拋光處理，之后用二次蒸餾水超聲清洗2～5分鐘；

（2）電沉積普魯士藍膜層

將預處理好的玻碳電極置于溶液A中，溶液A為FeCl₃、K₃[Fe(CN)₆]、KCl和HCl的混合溶液，其中FeCl₃的濃度為2.5mmol·L^-1，K₃[Fe(CN)₆]的濃度為2.5mmol·L^-1，KCl的濃度為0.1mol·L^-1，HCl的濃度為0.1mol·L^-1，在0.4V恒電位沉積40秒，用二次蒸餾水沖洗，之后再置于溶液B中，溶液B為KCl和HCl的混合溶液，其中KCl的濃度為0.1mol·L^-1，HCl的濃度為0.1mol·L^-1，在-0.05～0.35V以50mV·s^-1循環掃描25圈，之后用二次蒸餾水沖洗干凈，再置于100℃加熱1～1.2小時，在玻碳電極外表面制得普魯士藍膜層；

（3）電沉積第一納米金膜層

玻碳電極經步驟（2）處理后置于100mg·L^-1的HAuCl₄溶液中在-0.2V恒電位掃描30秒，電沉積第一納米金膜層，在普魯士藍膜層上制得第一納米金膜層，之后用二次蒸餾水沖洗干凈；

（4）自組裝L-半胱氨酸膜層

玻碳電極經步驟（2）和步驟（3）處理后置于L-半胱氨酸溶液中，在0～35℃浸泡4～6小時，在第一納米金膜層上自組裝得到L-半胱氨酸膜層；

（5）自組裝第二納米金膜層

制備納米金溶液：取100mL質量百分比濃度為0.01%的氯金酸溶液，攪拌、加熱，至沸騰后加入2.5mL質量百分比濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，繼續攪拌并保持沸騰10～20分鐘，之后保持攪拌冷卻至室溫，得到納米金溶液；

所述納米金溶液在0～35℃下，用離心分離器以30000轉/分的轉速濃縮20分鐘，之后棄去上清液，向剩余液中加入0.01mol·L^-1的NaCl溶液0.1～0.5mL，得到溶液C；

玻碳電極經步驟（2）、步驟（3）和步驟（4）處理后置于溶液C中，在0～35℃浸泡8～12小時，在L-半胱氨酸膜層上自組裝得到第二納米金膜層；

（6）自組裝苯并（a）芘抗體膜層

玻碳電極經步驟（2）、步驟（3）、步驟（4）和步驟（5）處理后置于0.1～1mg·L^-1的苯并(a)芘抗體的磷酸鹽緩沖液中，浸泡8～12小時，在第二納米金膜層上自組裝得到苯并（a）芘抗體膜層，之后用二次蒸餾水沖洗，然后浸入質量百分比濃度為1%的卵清白蛋白溶液中，在37℃溫育2～2.5小時，制得無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器。

3.根據權利要求2所述的無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的打磨拋光處理是將玻碳電極用三氧化鋁懸浮液在麂皮上打磨拋光。

4.根據權利要求2所述的無標記電流型苯并(a)芘免疫傳感器的制備方法，其特征在于，第一納米金膜層中的納米金的粒徑為90～110nm。