[發明專利]一種檢測肌酐的試劑盒

有效

• 申請號: 201110166136.6
• 申請日: 2011-06-20
• 公開（公告）號: CN102253041A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 董理
• 申請（專利權）人: 董理
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 逯長明

技術領域

本發明涉及醫學檢驗測定技術領域，具體的說是涉及一種檢測肌酐的試劑盒。

背景技術

肌酐(creatinine，Cr)是肌肉在人體內代謝的產物，每20g肌肉代謝可產生1mg肌酐。血中肌酐來自外源性和內源性兩種，外源性肌酐是肉類食物在體內代謝后的產物；內源性肌酐是體內肌肉組織代謝的產物。在肉類食物攝入量穩定時，身體的肌肉代謝又沒有大的變化，肌酐的生成就會比較恒定。

在肌肉中，肌酸主要通過不可逆的非酶脫水反應緩緩地形成肌酐，再釋放到血液中，隨尿排泄。因此血肌酐與體內肌肉總量關系密切，不易受飲食影響。肌酐是小分子物質，通過腎小球濾過排出體外。在腎小管內很少吸收，每日體內產生的肌酐，幾乎全部隨尿排出，一般不受尿量影響。腎功能不全時，腎小球過濾降低，造成血清肌酐水平增加在體內蓄積成為對人體有害的毒素。血漿肌酐的正常上限值為100μmol/L左右。

腎單位時間內，把若干毫升血漿中的內生肌酐全部清除出去，稱為內生肌酐清除率(Ccr)。臨床上檢測血肌酐，計算內生肌酐清除率，可反映腎小球濾過功能和粗略估計有效腎單位的數量，因其操作方法簡便，干擾因素較少，敏感性較高，為目前臨床常用的較好的腎功能試驗之一。

血清肌酐含量的測定方法有很多，現有技術中主要有酶比色法和Jaffe氏苦味酸測定法。

酶比色法的反應原理是以肌酐作為底物，經肌酐脫氨酶催化脫氨生成甲基乙內酰脲，氨與α-酮戊二酸和NADH在谷氨酸脫氫酶的作用生成谷氨酸，NAD和水，在340nm波長下測定NADH的吸光度變化率，計算其含量。雖然酶比色法廣泛應用于肌酐測定，但是酶比色法試劑穩定性不好，檢測結果重復性差，且價格昂貴。

Jaffe氏苦味酸法的反應原理是樣品中的肌酐在堿性環境與苦味酸(2，4，6-三硝基苯酚)反應生成橙紅色的復合物，將反應液置于紫外/可見光分析儀下或半、全自動生化分析儀下，檢測在主波長510nm處吸光度上升的速度，通過吸光度變化值，測算樣品中肌酐的活性。然而現有的Jaffe氏苦味酸法試劑穩定性不好，2，4，6-三硝基苯酚與堿性緩沖溶液混合后24h內就明顯變紅，致使檢測結果偏高，檢測準確性降低。

發明內容

有鑒于此，本發明目的是針對現有檢測肌酐的試劑盒中2，4，6-三硝基苯酚與堿性緩沖溶液混合穩定性差的問題，提供了一種穩定性好的檢測肌酐的試劑盒。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測肌酐的試劑盒，包括2，4，6-三硝基苯酚、pH12.5～13.5的緩沖溶液和曲拉通X-100與二甲基亞砜的混合物。

2，4，6-三硝基苯酚，又名苦味酸，英文名為2，4，6-Trinitrophenol、Picric?acid，為淡黃色結晶固體，具有苦杏仁味，分子式為C₆H₃N₃O₇，分子量為229.11。現有的Jaffe氏苦味酸法試劑穩定性差，2，4，6-三硝基苯酚與堿性緩沖溶液混合后24h內就明顯變紅。本發明人發現曲拉通X-100與二甲基亞砜的混合物可包圍2，4，6-三硝基苯酚的分子，在pH12.5～13.5的緩沖體系中，可以減緩2，4，6-三硝基苯酚與NaOH的迅速接觸，提高試劑的穩定性，保證肌酐檢測結果的準確性。

優選的，本發明所述試劑盒中，所述曲拉通X-100與二甲基亞砜體積比為1∶50～1∶100。

優選的，本發明所述試劑盒中，所述二甲基亞砜的加入量為1～20v/v％。試驗表明，隨著二甲基亞砜加入量的增多，空白吸光度的變化越小，當二甲基亞砜加入量超過10v/v％后，即加入量為10～20v/v％時空白吸光度基本不再變化。因此，本發明所述試劑盒中，所述二甲基亞砜的加入量優選為9.5～10.5v/v％，以降低成本，更優選為10v/v％。

由于肌酐與2，4，6-三硝基苯酚在堿性環境下反應才能生成橙紅色的復合物，因此為了保證待測樣品中的肌酐能與2，4，6-三硝基苯酚反應，本發明所述試劑盒還包括pH12.5～13.5的緩沖溶液。作為優選，本發明所述pH12.5～13.5的緩沖溶液為Tris、碳酸鈉、碳酸氫鈉和氫氧化鈉的混合溶液。Tris、碳酸鈉和碳酸氫鈉可以形成緩沖體系，氫氧化鈉可以保證緩沖體系為堿性。