[發明專利]單分散性聚甲基丙烯酸酯微球在萬古霉素柱層析純化中的應用

無效

• 申請號: 201110164335.3
• 申請日: 2011-06-19
• 公開（公告）號: CN102276699A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 江必旺;陳榮姬;吳俊成;林生躍;裘金明
• 申請（專利權）人: 蘇州納微生物科技有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/22
• 代理公司: 江蘇銀創律師事務所 32242
• 代理人: 何震花

技術領域

本發明涉及一種單分散性聚甲基丙烯酸酯微球的應用，尤其涉及單分散性聚甲基丙烯酸酯微球在抗生素萬古霉素的提取純化中的應用。

背景技術

萬古霉素是由微生物在控制發酵條件下產生的一種糖肽類抗生素，已知能抑制細菌細胞壁的和成及改變細胞膜的滲透性。其主要用途是治療革蘭氏陽性菌引起的感染疾病，對于耐藥金黃色葡萄球菌有明顯的療效，也用于治療對青霉素過敏或使用青霉素和頭孢菌素沒有效果的患者。

在分離純化抗生素、氨基酸、多肽、蛋白質以及天然產物程序中，離子交換層析是最常用的方法之一。其層析介質主要由三部分組成，第一部分是母體結構，即載體；第二部分是固定在母體結構上的帶電功能基團；第三部分是與功能基團帶相反電荷的活動離子。與傳統的離子交換樹脂相比，用于生物大分子分離的離子交換層析介質除了具備高的離子密度、具有一定的耐壓、耐酸堿性能外，還要求母體結構足夠親水，并且要具有均勻的粒徑。目前用于生物大分子分離的介質大多數不具備所有的以上特點，在實際應用中具有缺陷。

李蓉等?(分析化學研究報告,?1999,?27,?517-522)?使用硅膠為基質，鍵合上帶弱陽離子的硅烷偶聯劑，合成弱陽離子層析介質用于溶菌酶的分離純化，其對蛋白質能達到很好的分離效果。但是硅膠基質不具有耐堿性，這限制了它的應用范圍。

中國專利101440127公開了一種用葡聚糖基質的CM?Sephadex?C-25(GE?Healthcare)分離純化萬古霉素的方法，該方法以碳酸氫銨水溶液為流動相，能得到95%以上的純度及70%以上的回收率。但是該方法中使用的分離介質為葡聚糖基質，其在不同鹽濃度下床體積會發生非常明顯的變化，同時葡聚糖基質較軟，不耐高壓，這在快速的分離上有這很大的局限。

Wei等(Journal?of?Separation?Science,?2006,?29,?5–13)?通過在不銹鋼色譜柱內共聚甲基丙烯酸環氧丙酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯，經過修飾后合成弱陽離子色譜柱，但是該分離介質為塊狀，其比表面積較小，基團密度較低。

陸妙龍等(化學世界,?1984,?10,?369-373)?以聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物為基質，合成的弱陽離子層析介質，這種介質疏水性較強，而且其中的氯甲基化步驟要使用到氯甲醚強致癌性試劑，在生產上有局限性。

發明內容

本發明提供一種單分散性聚甲基丙烯酸酯微球作為層析介質在萬古霉素柱層析純化中的應用。

為達到上述目的，本發明的技術方案是在萬古霉素柱層析純化中，采用Uni-PGM-50（單分散性聚甲基丙烯酸酯微球,?蘇州納微生物科技有限公司）作為填料的柱進行柱層析。

將單分散性聚甲基丙烯酸酯微球Uni-PGM-50做為填料裝入色譜柱成為固定相，填料裝入色譜柱方法為公知技術，在此不再贅述。把含有待分離或分析含萬古霉素的混合物溶液流過該色譜柱，然后用鹽的水溶液作為流動相洗脫吸附在Uni-PGM-50固定相上的待分離或分析的萬古霉素。

所述的鹽的水溶液是NH₄HCO₃水溶液。

本發明的有益效果是：Uni-PGM-50做為柱層析填料床不但利于以水溶液做為流動相分離純化萬古霉素達到高純度和高回收率，而且柱層析填料床的體積不隨著流動相的鹽濃度發生變化，同時耐高壓，耐流動相酸堿度大幅度的改變，同時可用低濃度鹽溶液將吸附在填料上的萬古霉素洗脫下來。

附圖說明

圖1是實施例一使用的蘇州納微生物科技有限公司Uni-PGM-50單分散性聚甲基丙烯酸酯微球的掃描電鏡（Scanning?Electron?Microscopy）照片。

具體實施方式

下面通過實施例更詳細地說明本發明。但是本發明的范圍并不限于這些實施例。

實施例一