[發明專利]瘦肉精多殘留聯檢試紙卡及其制備方法

無效

• 申請號: 201110163903.8
• 申請日: 2011-06-17
• 公開（公告）號: CN102230937A
• 公開（公告）日: 2011-11-02
• 發明（設計）人: 職愛民;胡驍飛;張改平;鄧瑞廣;李孟順;楊繼飛;劉慶堂;趙東;邢廣旭;柴書軍;楊艷艷;李青梅;滕蔓
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/531;G01N33/566
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張愛軍

1.一種瘦肉精多殘留聯檢試紙卡，包括塑料支撐物和試紙芯，塑料支撐物包括底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、層析膜和吸水墊依次粘貼到襯板上制成，層析膜上設有檢測線和對照線，其特征是：所述金標物結合墊為吸附有二～五種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗瘦肉精的單克隆抗體或多克隆抗體，檢測線為二～五條相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原，對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗載體蛋白IgG抗體印制而成，檢測線和對照線沿層析膜橫向平行排列。

2.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征是：所述金標抗體和相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原為：第一組：金標抗鹽酸克倫特羅CL抗體，檢測線為CL-載體蛋白結合抗原；第二組：金標抗萊克多巴胺RAC抗體，檢測線為RAC?-載體蛋白結合抗原；第三組：金標抗沙丁胺醇SAL抗體，檢測線為SAL-載體蛋白結合抗原；第四組：金標特步特林TBL抗體，檢測線為TBL-載體蛋白結合抗原；第五組：金標抗西馬特羅CIM抗體，檢測線為CIM-載體蛋白結合抗原；采用其中的二組、三組、四組或五組，分別組成二聯檢試紙卡、三聯檢試紙卡、四聯檢試紙卡或五聯檢試紙卡。

3.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征是：所述吸水墊采用濾紙、海綿或無紡布制作，所述襯板用不吸水的硬質塑膠條制作，所述樣品墊采用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制作；層析膜采用尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜制成，對照線采用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成；所述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清白蛋白、人血清白蛋白或鑰孔血藍蛋白。

4.權利要求1所述的瘦肉精多殘留聯檢試紙卡的制備方法，包括瘦肉精-載體蛋白結合抗原的制備、瘦肉精金標物的制備、IgG抗體的制備、試紙芯的制備，其特征是：所述瘦肉精-載體蛋白結合抗原包括以下瘦肉精金標抗體和相應的結合抗原，第一組：金標抗鹽酸克倫特羅抗體，檢測線為CL-載體蛋白結合抗原；第二組：金標抗萊克多巴胺抗體，檢測線為RAC?-載體蛋白結合抗原；第三組：金標抗沙丁胺醇抗體，檢測線為SAL-載體蛋白結合抗原；第四組：金標特步特林抗體，檢測線為TBL-載體蛋白結合抗原；第五組：金標抗西馬特羅抗體，檢測線為CIM-載體蛋白結合抗原。

5.權利要求4所述的制備方法，其特征是：所述CL-載體蛋白結合抗原制備時包括以下步驟：在0～4℃冰浴條件下，稱取5～15mg?CL?溶于1～3mL、0.1mol/L的稀鹽酸中，攪拌下滴加濃度為10%的NaNO₂溶液，反應2～4h，得到反應液；稱取5-10mg載體蛋白溶于1-3mLPBS液中，攪拌下緩慢加入所述反應液中，調節pH至8.5～9.5，0～4℃攪拌、過夜；收集反應液于透析袋中，在4℃下用PBS透析3～5天，每天更換透析液2～3次，最后得到所述CL-載體蛋白結合抗原。

6.根據權利要求4所述的試紙卡，其特征是：所述RAC?-載體蛋白結合抗原制備時包括以下步驟：稱取5～20mg的載體蛋白置于螺口瓶中，用雙蒸水溶解，用1?mol/L?的NaOH調節pH?至10.8，加入1,4-丁二醇二縮水甘油醚，氮氣保護下室溫避光攪拌24?h，得活化的載體蛋白溶液；稱取15～20mg?TBL溶于2-5ml、1?mol/L?的NaOH?中，攪拌下緩緩加入所述載體蛋白溶液中，氮氣保護下攪拌20?h，反應產物用PBS透析3天，每天換液3～6次，透析后得到純化的RAC?-載體蛋白結合抗原。

7.根據權利要求4所述的試紙卡，其特征是：所述SAL-載體蛋白結合抗原制備時包括以下步驟：將80-100mg硫酸沙丁胺醇加入甲醇中，室溫下攪拌使之溶解，加入40-60mg琥珀酸酐，攪拌下反應72h；將反應后的溶液放在通風櫥中12h，使甲醇揮發完全，然后放入真空干燥箱中烘干，得到沙丁胺醇琥珀酸衍生物；稱取該衍生物20-30?mg溶于pH為4.8的tris-HCL緩沖液中，加入碳二亞胺30～40mg，攪拌反應12h，得反應液；稱取載體蛋白20-30mg溶于2-5mL的tris-HCL緩沖液中，得到載體蛋白溶液；將所述載體蛋白溶液逐滴加入所述反應液中，室溫下攪拌反應24h；反應結束后裝入透析袋中4℃PBS透析72h，換液6～9次，即得到SAL-載體蛋白結合抗原。