[發明專利]人CD3+CD8+γδT淋巴細胞的保存方法有效
| 申請號: | 201110162691.1 | 申請日: | 2011-06-16 |
| 公開(公告)號: | CN102265819A | 公開(公告)日: | 2011-12-07 |
| 發明(設計)人: | 蔣宇揚;劉英;初碧珠;陳喆 | 申請(專利權)人: | 清華大學深圳研究生院 |
| 主分類號: | A01N1/02 | 分類號: | A01N1/02 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | cd3 cd8 淋巴細胞 保存 方法 | ||
技術領域
本發明涉及一種T淋巴細胞的保存方法,特別涉及人CD3+CD8+γδT淋巴細胞的保存方法。
背景技術
淋巴細胞是具有特異免疫識別功能的細胞系,人和哺乳類動物的淋巴細胞系是由形態相似、功能各異的不均一細胞群所組成。按其個體發生、表面分子和功能的不同,可將淋巴細胞系分為T細胞和B細胞二個亞群。其中的T細胞是由一群功能不同的異質性淋巴細胞組成,由于它在胸腺內分化成熟故稱為T細胞。成熟T細胞由胸腺遷出,移居于周圍淋巴組織中淋巴節的副皮質區和脾白髓小動脈的周圍。不同功能成熟的T細胞均屬小淋巴細胞,在形態學上不能區分,但可借其細胞膜表面分子不同加以鑒別。在T細胞發育不同階段以及成熟T細胞在靜止期和活化期,其細胞膜分子表達的種類和數量均不相同。由于這些分子在T細胞表面相當穩定,故可視為T細胞的表面標志,可以用以分離、鑒定不同功能的T細胞。這些分子的單克隆抗體對臨床相關疾病的診斷和治療也具有重要應用價值。其中,TCR(T?cell?receptor)是T細胞識別蛋白抗原的特異性受體,不同的T細胞克隆其抗原識別受體的分子結構也是不相同的。TCR有兩種類型,均由兩條不同的跨膜的多肽鏈組成,即αβTCR和γδTCR。大多數成熟T細胞(約占95%)的TCR分子是由α和β二條異二聚體肽鏈組成的αβTCR分子。TCR?γδ細胞多見于胸腺內早期T細胞(CD4-,CD8-,TCR?γδ+),而在人周圍血成熟T細胞(CD3+,TCR?γδ+)中所占的比例甚少,約為1%~10%。對這種新發現的T細胞的生理功能尚不清楚。
發明內容
本發明的目的是提供人CD3+CD8+γδT淋巴細胞的保存方法。
本發明所提供的人CD3+CD8+γδT淋巴細胞的保存方法,包括如下步驟:將人CD3+CD8+γδT淋巴細胞在由如下配比的物質組成的無菌保存液中保存:枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)13.2g、枸櫞酸(C6H8O7·H2O)4.8g、葡萄糖(C6H12O6·H2O)14.7g和水1000ml。
所述人CD3+CD8+γδT淋巴細胞在所述無菌保存液中的含量是(2-3)×109個細胞/L;
所述人CD3+CD8+γδT淋巴細胞表達如下三種T淋巴細胞膜分子:人白細胞分化抗原CD3、人白細胞分化抗原CD8和人γδT細胞受體。
所述無菌保存液的pH是7.2-7.4。
所述保存的溫度為2-8℃,最好是4℃。
在上述溫度和培養基中,所述保存的時間為可為12-24小時,如24小時。
實驗證明,人CD3+CD8+γδT淋巴細胞在上述無菌保存液中在4℃保存24小時,仍表達如下三種T淋巴細胞膜分子:人白細胞分化抗原CD3、人白細胞分化抗原CD8和人γδT細胞受體。
附圖說明
圖1為肺癌病史2年的男患者人CD3+CD8+γδT淋巴細胞治療前后CT檢查對比。箭頭示肺癌病灶及轉移灶
A為肺窗的CT檢查結果
上左為2009.08.04日輸注實施例1分離的人CD3+CD8+γδT淋巴細胞前的結果
上右為2009.09.22日的CT檢查結果
下左為2009.11.19日的CT檢查結果
下右為2010.03.07日的CT檢查結果
B為縱隔窗的CT檢查結果
上左為2009.08.04日輸注實施例1分離的人CD3+CD8+γδT淋巴細胞前的結果
上右為2009.09.22日的CT檢查結果
下左為2009.11.19日的CT檢查結果
下右為2010.03.07日的CT檢查結果
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