[發明專利]一種中國被毛孢的生產方法

有效

• 申請號: 201110156872.3
• 申請日: 2011-06-13
• 公開（公告）號: CN102220249A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 徐洋;翟云燕;柯越海
• 申請（專利權）人: 杭州柯氏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 浙江英普律師事務所 33238
• 代理人: 陳小良

1.一種中國被毛孢的生產方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)半固體菌種斜面培養：

培養基溶于煮沸的水中，調節pH至7.2，在121℃、滅菌30分鐘，制成斜面培養基；冷卻后放入28℃培養箱培養3天，確認無雜菌污染后，接入中國被毛孢菌種，均勻涂布；控制溫度17～19℃培養，培養時間30～45天；然后，放入0～4℃冰箱保存；

其中斜面培養基的組成按重量百分比為：脫脂蠶蛹粉2.1～3.0％，玉米粉1.5％，麩皮1～5％，葡萄糖2％，KH₂PO₄0.02％，MgSO₄0.01％，瓊脂1.8％，其余為水；

(2)液體菌種搖瓶培養：

把斜面培養后的菌種接種到裝有液體培養基的搖瓶，在搖床震蕩培養，培養溫度17～19℃，搖床轉速100～120rpm，培養8～13天，接入無菌接種罐內，供液體菌種增殖培養接種用；

搖瓶菌種培養基的組成按重量百分比為：脫脂蠶蛹粉2.1～3.0％，玉米粉1.5％，麩皮1～5％，葡萄糖2％，KH₂PO₄0.02％，MgSO₄0.01％，其余為水；

(3)液體菌種增殖培養：

液體菌種增殖培養在培養罐中培養，培養條件為：罐壓0.03～0.05Mpa，通氣量1∶0.2，罐溫17～19℃，攪拌速度120～140rpm，培養7～12天；當培養液中葡萄糖糖量快速下降，菌絲生長旺盛，菌絲稠密，菌絲體體積濃度不低于13％，檢查無雜菌后，移入發酵罐；

液體菌種增殖培養的培養基組成按重量百分比為：脫脂蠶蛹粉2.1～3.0％，玉米粉1.5％，麩皮1～5％，葡萄糖2％，KH₂PO₄0.02％，MgSO₄0.01％，其余為水；

(4)發酵培養

發酵培養在培養罐中培養，培養條件為：罐壓0.03～0.05Mpa，通氣量1∶0.2，罐溫17～19℃，攪拌速度120～140rpm，培養9～12天，菌絲體體積濃度達25％以上，葡萄糖降至1.0％，視為發酵終點，放罐；

發酵培養基的組成按重量百分比為：脫脂蠶蛹粉2.1％，麩皮5％，玉米粉1.5％，葡萄糖2％，魚蛋白胨0.25％，肉蛋白胨0.75％，酵母膏0.1％，KH₂PO₄0.02％，MgSO₄0.01％，其余為水；調節pH至7.2；

(5)固液分離：

經發酵培養后的發酵液經固液分離器分離，分離出菌絲體和發酵清液；

(6)膜分離：

將固液分離過程中的發酵清液用300-4000分子量的膜分離器分離，得膜分離濃液；

(7)菌絲體與分離濃液干燥：

將膜分離濃液噴入干燥器，與菌絲體一同干燥，干燥溫度在80-100℃，得產品。

2.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于步驟(1)中國被毛孢菌種的接入在18℃，接種量為10％，且為火焰保護無菌接種。

3.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于步驟(1)中所述的脫脂蠶蛹粉的含油量低于3％。

4.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于所述的脫脂蠶蛹粉，玉米粉，麩皮用10-20倍水提取，經過濾后，水提液加入培養基。

5.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于所述的中國被毛孢菌種是指經以上生產方法所得產品的水提物加入鼠肥大細胞RBL-2H3株進行無血清培養60小時，其細胞指數降低至1.5以下的中國被毛孢菌株。