[發明專利]一種稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法

無效

• 申請號: 201110154314.3
• 申請日: 2011-06-09
• 公開（公告）號: CN102251009A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 林毅
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 陳智海

技術領域

本發明涉及一種稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法。

背景技術

20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人參二醇(稀有人參皂甙IH-901，也稱為M1或Compound?K)，在天然的人參中不存在，是天然的二醇組人參皂甙在人腸道內的降解代謝產物。近年來諸多研究表明人參的許多生物學活性都是由該化合物引起的，特別是在抗腫瘤、抗衰老、抗炎癥等方面都體現良好的藥效。

IH-901將是一個很有前途的抗腫瘤藥物，未來將相繼以保健品及國家新藥形式陸續上市，稀有人參皂甙項目在21世紀生物醫藥及生物健康品具有前瞻性、稀缺性以及需求巨大性，國際國內市場對其需求有著巨大的潛力。目前稀有人參皂甙IH-901由于其價格昂貴，市場上含量在99％以上價格達1000萬元/公斤，而人參皂甙僅800元/公斤，難以被腫瘤病人使用，因此稀有人參皂甙IH-901的生產方法備受關注。

由于人參皂甙四環三萜母核結構上3位和20位糖苷鍵的特異性，決定了IH-901只能由溫和的生物轉化方法獲得，而常用的酸或堿水解方法是行不通的。目前，生物轉化方法通常包括微生物發酵和酶轉化兩種主要方法。

微生物發酵法制備所用的微生物主要是腸道厭氧菌，而其他微生物的研究比較少。腸道厭氧菌發酵最初是以人排泄物中的總菌物進行發酵，后來研究篩選單一腸道菌來轉化，如采用腸道乳酸菌轉化二醇型皂苷制備CK，發現運用Bifidobacterium?minimum?KK-1和B.choerinum?KK-2共發酵轉化Rb1時效果最好，轉化率達到41％左右，但腸道菌多為厭氧菌，培養條件苛刻，培養基成本高。另有研究篩選原始土壤微生物來降解人參皂苷，但酶解能力低下，目的產物收率不高，須通過優化發酵條件和菌種誘變等方法來提高轉化能力。中科院大連化學物理研究所申請發明專利用黑曲霉酶解人參皂甙制備稀有低極性人參皂苷的方法，所用黑曲霉菌是將各種來源的黑曲霉菌轉入含有人參皂甙的培養基中，經傳代培養、馴化、篩選得到的能夠酵解產生稀有人參皂甙及甙元的菌株。目前在微生物發酵制備方面并沒有適用大規模制備的成熟的方法或工藝。

而參照腸內菌代謝原理，酶轉化法制備是利用酶作為催化劑實現化學轉化的過程，是酶制劑對外源性底物進行結構性修飾所發生的化學反應。國內學者利用β-葡萄糖苷酶對三七莖葉總皂苷進行轉化，取得較好的轉化效果。也有從具有轉化活性的菌株中分離專一性更強的轉化酶，如從食用微生物Bifidobacterium?sp.Int57和Bifidobacterium?sp.SJ32中提取的粗酶，可轉化Rb₂和Rc成Rd和F₂，進而轉化成終產物人參皂甙IH-901，從人腸道菌Fusodobacterium?K-60分離純化的葡萄糖苷酶，亦能直接轉化Rb₁生成稀有人參皂甙IH-901。酶轉化法選擇性強，工藝研究控制方便，更有利于規模化制備。目前制約稀有人參皂甙IH-901生產的關鍵在于采用廉價而高效的工業酶制劑以及簡單的分離純化方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法。

本發明的技術方案是這樣的：稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法，通過如下方案實現：將1單位質量單體人參皂甙Rb1、0.1～0.3單位質量國產的蝸牛酶粗酶和1單位體積pH＝3～5的磷酸檸檬酸緩沖液混合均勻，于35～50℃下保溫10～20小時之后，終止反應；加入0.5單位質量乙醇進行萃取，離心收集乙醇層，將收集得到的乙醇層減壓濃縮后上硅膠柱，以CHCl₃-AcOEt-MeOH-H₂O下層為洗脫劑，洗脫0.8單位體積之后，開始收集洗脫液，將收集得到的洗脫液減壓濃縮后溶解于體積比為100∶70的乙醇和水的混合溶液中，室溫過夜，即可獲得純度達95％以上的IH-901結晶。

采用上述方案后，本發明的稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法，以單體人參皂甙Rb1為反應底物，反應的酶為廉價的國產蝸牛酶粗酶，產物分離純化非常簡單。而且，本發明的生產方法，由于采用單一底物和廉價的國產蝸牛酶粗酶，具有酶的來源豐富、原料成本低，以及產物提取簡單等優點。

具體實施方式

實施例一：

本發明的稀有人參皂甙IH-901結晶的簡易生產方法，通過如下步驟實現：