[發明專利]一種檢測淀粉酶的方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201110153417.8
• 申請日: 2011-06-09
• 公開（公告）號: CN102288559A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 董理
• 申請（專利權）人: 董理
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 逯長明

技術領域

本發明涉及醫學檢驗測定技術領域，具體的說是涉及一種檢測淀粉酶的方法和試劑盒。

背景技術

淀粉酶(α-Amylase)簡稱AMS或AMY，一類能將淀粉分子水解的酶，一般作用于可溶性淀粉、直鏈淀粉、糖元等α-1，4-葡聚糖，水解α-1，4-糖苷鍵，產生葡聚糖、麥芽糖和葡萄糖分子。淀粉酶在胰腺和唾液腺中含量豐富，胰淀粉酶由胰腺以活性狀態排入消化道，是最重要的水解碳水化合物的酶，和唾液腺分泌的淀粉酶一樣都屬于α-淀粉酶。淀粉酶分子量小，可通過腎小球濾過，隨尿排出。當罹患胰腺疾病或有胰腺外分泌功能障礙時可引起淀粉酶活性升高或降低，因此，測定血清和尿液中的淀粉酶對胰腺炎的診斷具有重要意義。尿淀粉酶水平波動較大，所以優選血清淀粉酶檢測，或兩者同時測定。

血清和尿液中淀粉酶活性的測定方法有很多種，主要有黏度測定法、比濁法、糖化法、碘-淀粉比色法、酶速率法與染料釋放法等。其中，黏度測定法和比濁法由于影響因素較多，缺乏特異性和靈敏度，已被淘汰。糖化法雖然可直接測量酶活性，但操作復雜不適用于臨床常規檢查。目前應用較為廣泛的為碘量法，酶速率法和染料釋放法。其中，碘-淀粉比色法因具有成本低、檢測不需要昂貴儀器、試劑穩定、操作簡便、結果可靠，在臨床上得到廣泛應用。

碘-淀粉比色法測定血清和尿液中淀粉酶的反應原理為血清(漿)和尿液中的α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷鍵水解，產生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6糖苷鍵支鏈的糊精。在底物定量的條件下，反應后加入碘液與未被水解的淀粉結合成藍色復合物，其藍色的深淺與未經酶促反應的空白管比較，淀粉酶活性越大，剩余淀粉越少，反應液顯色越淺，將最終產物置于紫外/可見光分析儀下或半自動生化分析儀下，檢測在主波長630nm處在吸光度值大小，從而測算樣品中淀粉酶的含量。

然而上述方法顯色劑碘液易升華揮發造成成份減少變淡影響反應顯色，致使檢測結果準確性降低。

發明內容

有鑒于此，本發明目的是提供一種穩定性高、準確性高的檢測淀粉酶酶的試劑盒。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測淀粉酶的方法，包括：

步驟1、在pH7.2的緩沖液中，待測樣品與可溶性淀粉混合得到混合液；

步驟2、碘化鉀與酸性碘酸鉀混合，與步驟1得到的混合液反應，在630nm波長下檢測吸光度，根據經上述相同處理的未經酶促的空白管的吸光度，計算待測樣品中淀粉酶的濃度。

血清(漿)和尿液中的α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷鍵水解，產生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6糖苷鍵支鏈的糊精。在底物定量的條件下，反應后加入碘液與未被水解的淀粉結合成藍色復合物，其藍色的深淺與未經酶促反應的空白管比較，檢測在主波長630nm處在吸光度值大小，從而測算樣品中淀粉酶的含量。本發明所述檢測方法以碘化鉀和酸性碘化鉀作為顯色液，碘化鉀和碘酸鉀在酸性條件下生成碘，與未反應的淀粉結合形成藍色復合物，避免直接使用碘液易升華揮發造成成份減少變淡影響反應顯色，提高檢測結果準確性。

優選的，所述碘酸鉀與碘化鉀的摩爾比為1∶5～6。

優選的，酸性碘酸鉀為8～12mmol/LpH2.0～3.0的碘酸鉀溶液。

為了酶與底物很好的結合，酶和底物都需要緩沖液提供適宜的解離環境。緩沖液的離子強度也影響著酶的活性，離子強度過高，電解質干擾酶和底物結合，酶活性將逐步下降，但離子強度過低也可能無法激活酶活性。一般選擇與生理環境的體液比較接近的離子強度。因此本發明所述檢測方法為了提供一個適宜的酶解環境，待測樣品與可溶性淀粉在pH7.2的緩沖液中混合。所述在pH7.2的緩沖液包括：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、Tris-鹽酸緩沖液和磷酸鹽緩沖液。作為優選，本發明所述檢測方法中所述pH7.2的緩沖溶液為50～100mmol/L?pH7.2的磷酸鹽緩沖液，包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液和磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液。

優選的，所述可溶性淀粉濃度為960mg/L。

本發明還提供了一種檢測淀粉酶的試劑盒，包括960mg/L可溶性淀粉、50～100mmol/L?pH7.2的磷酸鹽緩沖液、8～10mmol/LpH2.0～3.0的碘酸鉀溶液和30～50mmol/L碘化鉀。

優選的，本發明所述試劑盒還包括50～70mmol/L的苯甲酸鈉，苯甲酸鈉作為防腐劑保證試劑穩定性。