[發(fā)明專利]賴氨酸的三級(jí)發(fā)酵制備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110151557.1
• 申請(qǐng)日: 2011-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN102234667A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬吉銀;陳崇安;孟剛;曹洪;程耀東;劉鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏伊品生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P13/08
• 分類號(hào): C12P13/08;C12R1/15
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.發(fā)酵L-賴氨酸的方法，其包括：

(1)將表達(dá)二氫吡啶二羧酸合成酶變體的工程菌接入第一發(fā)酵罐于30-33℃培養(yǎng)8-12小時(shí)，其中所述二氫吡啶二羧酸合成酶變體相對(duì)于野生型二氫吡啶二羧酸合成酶的活性提高；

(2)將步驟(1)獲得的培養(yǎng)液以3-7％(體積)的接種量接種于第二發(fā)酵罐，于36-40℃培養(yǎng)8-12小時(shí)；

(3)將步驟(2)獲得的培養(yǎng)液以10-20％(體積)的接種量接種于第三發(fā)酵罐，于36-40℃培養(yǎng)1-5小時(shí)；

(4)向第三發(fā)酵罐持續(xù)流加糖，其中糖的每小時(shí)流加量為第三發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液量的0.2-0.35％(重量)，進(jìn)行10-18小時(shí)；和

(5)向第三發(fā)酵罐持續(xù)流加糖和氮源，其中糖的每小時(shí)流加量為第三發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液量的0.3-0.5％(重量)，而且氮源的每小時(shí)流加量為第三發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液量的0.1-0.25％(重量)，進(jìn)行30-65小時(shí)，優(yōu)選50-55小時(shí)。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中第一發(fā)酵罐和第二發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基配方為：每18立方米培養(yǎng)基中含，葡萄糖500-750公斤，甘蔗糖蜜50-300公斤，玉米漿400-600公斤，KH₂PO₄?30-80公斤，MgSO₄·7H₂O?3-15公斤，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.1-1公斤，MnSO₄·7H₂O?0.1-1公斤，生物素5-30克，和葉酸3-10克。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中第一發(fā)酵罐和第二發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基配方為：每18立方米培養(yǎng)基中含，葡萄糖600公斤，甘蔗糖蜜200公斤，玉米漿520公斤，KH₂PO₄?45公斤，MgSO₄·7H₂O?7公斤，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.5公斤，MnSO₄·7H₂O?0.5公斤，生物素12克，和葉酸5克。

4.權(quán)利要求1所述的方法，其中第三發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方為：每300立方米培養(yǎng)基中含，蔗糖10000-15000公斤，玉米漿10000-15000公斤，KH₂PO₄?700-1200公斤，MgSO₄·7H₂O?5-220公斤，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?5-25公斤，MnSO₄·7H₂O?5-220公斤，生物素150-300克，和葉酸50-120克。

5.權(quán)利要求4所述的方法，其中第三發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方為：每300立方米培養(yǎng)基中含，蔗糖12000公斤，玉米漿12000公斤，KH₂PO₄?1000公斤，MgSO₄·7H₂O100公斤，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?12公斤，MnSO₄·7H₂O?120公斤，生物素200克，和葉酸85克。

6.權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(4)和(5)中的溫度與步驟(3)中的溫度相同，優(yōu)選為38-39℃。

7.權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(4)和(5)中的糖是蔗糖；和/或，其中步驟(5)中的氮源是無機(jī)氮源，優(yōu)選是硫酸銨或氯化銨。

8.權(quán)利要求1所述的方法，其中工程菌是棒狀桿菌，優(yōu)選是Corynebacterium?glutamicum。

9.權(quán)利要求1所述的方法，其中二氫吡啶二羧酸合成酶變體在野生型二氫吡啶二羧酸合成酶的M13、V60或A83的位置上被其他天然氨基酸替換，優(yōu)選替換選自M13K、V60L和A83G，最優(yōu)選二氫吡啶二羧酸合成酶變體的氨基酸序列如SEQ?ID?No：1所示。

10.權(quán)利要求1-9之任一所述的方法制備的發(fā)酵液，其中L-賴氨酸的含量不低于155g/L，優(yōu)選不低于170g/L。