[發(fā)明專(zhuān)利]一種可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的具有LAMP導(dǎo)向的BAP31疫苗載體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110147000.0
• 申請(qǐng)日: 2011-06-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102210875A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊琨;宋朝君;金伯泉;李海濤;孫元杰;魏玉英
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K48/00
• 分類(lèi)號(hào): A61K48/00;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 西安通大專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 陸萬(wàn)壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于DNA疫苗技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的具有LAMP導(dǎo)向的BAP31疫苗載體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是當(dāng)前嚴(yán)重影響人類(lèi)健康、威脅人類(lèi)生命的主要疾病之一，因此，世界衛(wèi)生組織和各國(guó)政府衛(wèi)生部門(mén)都把攻克癌癥列為一項(xiàng)首要任務(wù)。在第18屆國(guó)際抗癌癥聯(lián)盟大會(huì)上，世界衛(wèi)生組織發(fā)表的一項(xiàng)研究報(bào)告表明，全球癌癥狀況將日益嚴(yán)重，今后20年新患者人數(shù)將由目前的每年1000萬(wàn)增加到1500萬(wàn)，因癌癥而死亡的人數(shù)也將由每年600萬(wàn)增至1000萬(wàn)。為應(yīng)對(duì)上述嚴(yán)峻形勢(shì)，報(bào)告呼吁各國(guó)制訂反癌癥的全國(guó)計(jì)劃和具體實(shí)施方案，并特別強(qiáng)調(diào)對(duì)癌癥預(yù)防、早期檢查和早期治療的重要意義。

一直以來(lái)，特異性免疫治療是眾多研究人員力圖清除腫瘤微小殘留病的有效方法。DNA疫苗能在真核細(xì)胞中獲得持久的表達(dá)，抗原和MHC-I類(lèi)分子結(jié)合后被呈遞到細(xì)胞表面，被CD8⁺T細(xì)胞的受體識(shí)別而產(chǎn)生CD8⁺細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。

BAP31即B細(xì)胞受體相關(guān)蛋白31，最初由Kim等人于1994年鑒定，由于其選擇性地與膜型IgD結(jié)合，故認(rèn)為它是B細(xì)胞受體相關(guān)蛋白家族的一個(gè)成員，命名為BAP31。成熟的BAP31分子量為28kDa，共有246個(gè)氨基酸殘基，在進(jìn)化中高度保守，人和小鼠在核酸水平和氨基酸水平上分別有91％和95％的同源性。

應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法，Manley等人系統(tǒng)研究了BAP31在人體多種正常組織中的表達(dá)分布情況。研究結(jié)果顯示，BAP31在胸腺、小腦、腺垂體、甲狀腺、腎臟和卵巢組織中均有表達(dá)，但均局限于少數(shù)細(xì)胞，在骨骼肌中未見(jiàn)表達(dá)。胸腺組織中BAP31在淋巴細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)；小腦中主要表達(dá)于蒲肯野細(xì)胞的樹(shù)突上，軸突和胞核為陰性；腺垂體中的內(nèi)分泌細(xì)胞高表達(dá)BAP31；卵巢組織中顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞中可見(jiàn)BAP31的表達(dá)，間質(zhì)細(xì)胞為陰性；BAP31在甲狀腺組織中主要表達(dá)于濾泡的立方上皮細(xì)胞；腎臟組織中近曲小管的立方上皮細(xì)胞中有BAP31分子的表達(dá)；而在腎上腺組織中，BAP31主要表達(dá)于皮層細(xì)胞。

研究結(jié)果還顯示，BAP31在正常宮頸組織的立方上皮細(xì)胞、卵巢組織的顆粒細(xì)胞、結(jié)腸組織和直腸組織的腺上皮細(xì)胞上有微弱表達(dá)；而在乳腺組織、食道組織、肝臟組織、肺組織中未見(jiàn)表達(dá)。BAP31在宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、食道癌、肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌和肺癌組織均見(jiàn)高水平表達(dá)，陽(yáng)性率在58.0％～87.5％之間，陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于胞漿。因此，BAP31是一個(gè)腫瘤相關(guān)抗原，可做為DNA疫苗研究的理想靶點(diǎn)。

溶酶體是酸性的、富含多種蛋白水解酶的帶膜亞細(xì)胞器，也是外源性抗原加工途徑MHCII類(lèi)分子器室(MIIC)的重要組成部分。外源性抗原就是在MIIC中被蛋白酶水解成合適大小的肽段，然后在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正確折疊組裝、并與MIIC的MHCII類(lèi)分子結(jié)合，所形成的MHCII/抗原肽復(fù)合物，最后表達(dá)在細(xì)胞膜上，并進(jìn)一步被CD4⁺T細(xì)胞的抗原識(shí)別受體(TCR)所識(shí)別，誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答。研究發(fā)現(xiàn)，溶酶體膜蛋白成分介導(dǎo)著非常重要的功能，包括溶酶體內(nèi)腔的酸化，氨基酸、脂肪酸及碳水化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)等。

溶酶體相關(guān)膜蛋白(LAMP)是溶酶體膜上主要的蛋白成分，包括LAMP-1(CD107a)和LAMP-2(CD107b)，屬I(mǎi)型穿膜蛋白：N端溶酶體內(nèi)腔部分(lumen)、疏水穿膜部分(transmembrane)及C末端短胞漿尾(cytoplasmid?tail)，并且該保守的C末端短胞漿尾，在LAMP分子生物合成后被靶向到溶酶體過(guò)程中起著非常重要的作用。LAMP分子胞漿尾具有靶向作用，可通過(guò)其穿膜-胞漿區(qū)定向地結(jié)合亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)-內(nèi)吞體/溶酶體，并翻轉(zhuǎn)進(jìn)入其中。將編碼目的抗原的基因插入LAMP分子編碼溶酶體內(nèi)腔部分和胞漿尾基因之間構(gòu)成嵌合體，由于LAMP分子的導(dǎo)向作用，可將LAMP融合蛋白中的目的抗原直接攜帶進(jìn)入MIIC，從而可實(shí)現(xiàn)DNA疫苗所表達(dá)蛋白從內(nèi)源性抗原的MHC-I類(lèi)加工途徑向外源性抗原的MHC-II類(lèi)加工途徑的轉(zhuǎn)化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的問(wèn)題在于提供一種可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的具有LAMP導(dǎo)向的BAP31疫苗載體及其應(yīng)用，該疫苗載體能夠高效誘導(dǎo)特異性體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，可作為抗腫瘤的DNA疫苗應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：