[發明專利]一種不含基因組DNA的總RNA制備方法有效
| 申請號： | 201110146842.4 | 申請日： | 2011-06-02 |
| 公開（公告）號： | CN102250877A | 公開（公告）日： | 2011-11-23 |
| 發明（設計）人： | 朱國萍;徐蕾;王鵬;曹正宇;靳明明;徐雷雷;王文才;李雪 | 申請（專利權）人： | 安徽師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107 | 代理人： | 方南 |
| 地址： | 241000 安徽省*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因組 dna rna 制備 方法 | ||
1.一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，包括以下步驟：
a)使用重懸液重懸需要提取的生物材料；
b)加入與重懸液體積相同的十二烷基硫酸鈉溶液，室溫裂解3-5分鐘，或65度裂解0.5-1分鐘；
c)加入酸性醋酸鉀溶液，離心，去除出現的沉淀，取上清，醋酸鉀和十二烷基硫酸鈉溶液摩爾比值為1∶0.9-1.1；
d)將c)步驟所得上清加入酸性醋酸鉀溶液，硫氰酸胍貯液，使醋酸鉀終濃度為1mol/L，硫氰酸胍為1.5mol/L；離心5-10分鐘，取上清；
e)將d)步驟所得的上清加入離心式硅膠柱，離心；收集穿過液，在穿過液中加入無水乙醇，混勻后，-20℃靜置10-15分鐘，離心10-15分鐘，棄上清。
f)將所得RNA沉淀用洗滌液洗滌兩次，空氣中10-15分鐘晾干，然后加入超純水溶解，即可。
2.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的重懸液為50±10mmol/L葡萄糖和10±2mmol/L乙二酸四乙酸鈉(EDTA)的混合溶液。
3.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的生物材料為細菌菌體，菌體與重懸液的質量/體積比為20-50mg/100μL。
4.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的十二烷基硫酸鈉溶液液的重量濃度為2±0.2％。
5.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的酸性醋酸鉀溶液包含3±0.2mol/L醋酸鉀和6.5±0.4mol/L醋酸，pH為5.0±0.05。?
6.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的硫氰酸胍貯液濃度為4.5±0.1mol/L。
7.根據權利要求1所述的、一種不含基因組DNA的總RNA制備方法，其特征在于：所述的洗滌液包含70±5％乙醇，50±5mmol/L醋酸鈉，pH?5.2±0.05的混合溶液。?
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