[發(fā)明專(zhuān)利]半夏組織培養(yǎng)一步成種法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110146575.0
• 申請(qǐng)日: 2011-05-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102228005A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉萬(wàn)里;何忠軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 漢中植物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及半夏組培一步成種法，該技術(shù)屬于生物技術(shù)工程領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

半夏Pinellia?ternata(Thunb.)Breit.屬天南星科多年生草本植物，又叫旱半夏，主要含有生物堿、β-谷甾醇、多糖、氨基酸、揮發(fā)油、半夏蛋白及無(wú)機(jī)元素等多種成分，臨床應(yīng)用非常廣泛，距今已有2000多年的藥用歷史，是一味應(yīng)用十分普及、療效比較確切的常用中藥。?

半夏野生資源分布較廣，但由于耕作制度的改變和人們的過(guò)度采挖導(dǎo)致適宜半夏生長(zhǎng)的生態(tài)環(huán)境逐年縮小，隨著市場(chǎng)需求量的增加和人們對(duì)半夏的應(yīng)用研究不斷深入，其應(yīng)用范圍正在日益擴(kuò)大，市場(chǎng)供應(yīng)一直緊張。為了緩解半夏的供需矛盾，自上世紀(jì)80年代初，我國(guó)就開(kāi)始對(duì)半夏進(jìn)行野生變家種的試驗(yàn)研究，但由于半夏自然繁殖系數(shù)低，人工種植種源嚴(yán)重不足，為此如何解決半夏種源成為亟待解決的問(wèn)題。?

植物組織培養(yǎng)再生途徑主要為外植體完全脫分化形成愈傷組織，然后將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化出芽，再將其轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，但該途徑較繁瑣，種質(zhì)易產(chǎn)生變異，外植體分化塊莖數(shù)也不高，近年來(lái)，也有研究人員在某些植物的組織培養(yǎng)上創(chuàng)造出了一步成苗法。而一步成苗法就是外植體在脫分化后，不需要轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，而是直接在原培養(yǎng)基上再分化，分化的順序通常是先根后芽，直至形成健壯的全苗。其具有的特征是：再生周期短，外植體分化塊莖數(shù)高，易操作，培養(yǎng)程序簡(jiǎn)單，不影響增殖率，能保持原種特性，便于大規(guī)模?生產(chǎn)。?

半夏植株為肉質(zhì)莖的草本植物，研究中發(fā)現(xiàn)半夏一步成苗后在組培苗出瓶、洗脫培養(yǎng)基、移栽的過(guò)程中，由于人為操作造成半夏植株很容易被折斷和受創(chuàng)傷，導(dǎo)致部分半夏組培苗的移栽后直接死亡，成活率僅在30％～50％左右，雖然也有部分可在苗基上再次生長(zhǎng)，但是半夏生長(zhǎng)中隨著自然溫度的升高有正常的倒苗現(xiàn)象，生長(zhǎng)周期較短，導(dǎo)致半夏的一代組培種產(chǎn)量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)的實(shí)際需要。?

現(xiàn)有專(zhuān)利文獻(xiàn)：旱半夏組織培養(yǎng)快速快繁方法(申請(qǐng)?zhí)枺?00910218386)，包括以下步驟：1)配制培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基和其它組培階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含量為：基本培養(yǎng)基：用MS培養(yǎng)基，附加蔗糖15-45g/L，瓊脂10g/L，調(diào)節(jié)pH5.8；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS中添加KT1.0-3.0mg/L和2，4-D1.0-3.0mg/L；分化培養(yǎng)基：MS中添加KT1.0-3.0mg/L和2，4-D1.0-3.0mg/L；增殖培養(yǎng)基：MS中添加KT0.2-2.0mg/L和2，4-D0.2-2.0mg/L；生根培養(yǎng)基：MS中添加KT1.0-2.0mg/L和NAA0-1.0mg/L；2)培養(yǎng)無(wú)菌苗：將旱半夏塊莖進(jìn)行滅菌處理后，切成5mm左右的小塊，將其移至MS+KT2.0mg/L+2，4-D2.0mg/L的培養(yǎng)基上產(chǎn)生愈傷，其后轉(zhuǎn)入MS+KT3.0mg/L+2，4-D1.0mg/L的培養(yǎng)基上使其分化，將產(chǎn)生的叢芽塊，再將其切成單芽塊移至MS基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)得到無(wú)菌苗；3)誘導(dǎo)愈傷組織：在無(wú)菌條件下，將步驟2)培養(yǎng)出的無(wú)菌苗的葉片、葉柄及愈傷組織塊切成5mm大小的組織，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，?誘導(dǎo)形成愈傷組織；4)分化培養(yǎng)：將步驟3)誘導(dǎo)形成的愈傷組織移至分化培養(yǎng)基上使其分化出芽；5)增殖培養(yǎng)：將步驟4)生成的叢芽切成單芽(包含基部的愈傷組織塊)，接種至增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，使其再分化出芽；6)生根培養(yǎng)：將步驟5)形成的叢芽塊切成單芽(包含基部的愈傷組織塊)，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；7)移栽：當(dāng)步驟6)的生根組培苗生長(zhǎng)至3-5cm，根數(shù)在5根以上時(shí)，移栽入基質(zhì)中，在溫室中培養(yǎng)至成苗。?