[發明專利]一種處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法

有效

• 申請號: 201110146084.6
• 申請日: 2011-06-01
• 公開（公告）號: CN102250768A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 趙鳳清;王冬;柴寶榮
• 申請（專利權）人: 康源綠洲微生物技術（北京）有限公司;康源綠洲生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/20;C12N9/00;C12R1/01;C12R1/125
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司 11100
• 代理人: 劉徐紅

1.一種處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)備料：枯草芽孢桿菌粉劑；

(2)制備光合細菌菌液：首先將沼澤紅假單胞菌種進行種子培養，接種量為3％，溫度為26～30℃之間，培養7～10天，得到種光合細菌液；然后，進行發酵培養，把發酵培養基和占總重量的5～10％的待分離的污水或污泥混合，將pH值調至6.5～7.5，然后在121℃下高溫滅菌20分鐘，待冷卻后，接入種光合細菌液，接種量為1～5％，在溫度28～30℃，厭氧光照下培養5～7天，培養液由無色變為紅色，獲得深紅色的光合細菌菌液；

(3)土著菌的采集和培養：

i.土著菌的采集：從待處理的污水或污泥中取樣，置于無菌器皿中；

ii.土著菌的培養：待處理的污水或污泥與微生物培養基的重量比為97∶3～9∶1，在23～33℃，pH為6.5～7.5下培養5～10天；

iii.土著菌的富集培養：按10％的接種量在培養基中加入ii所得的土著菌，在pH值為6.5～7.5，溫度為23～33℃的條件下培養5～10天，獲得土著菌；

(4)工作菌的馴化培養：用逐漸增加培養液中污水或污泥濃度的方法進行馴化，按不同的淤泥負荷投加土著菌及復合培養基，同時加入占總重量0.1～0.4％的枯草芽孢桿菌酶粉劑，1～3％的光合細菌菌液，進行不同負荷、不同有機物質濃度的試驗，根據微生物生長情況確定馴化的最佳參數，重復3次得馴化工作酶菌復合劑；

(5)工作酶菌復合劑的馴化擴大培養：根據馴化培養最佳參數，加入馴化工作菌及復合培養基后，同時加入占總重量0.1～0.4％的枯草芽孢桿菌酶粉劑，1～3％的光合細菌菌液，在溫度23～32℃下培養5～7天，獲得馴化工作酶菌復合劑。

2.根據權利要求1所述的處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，所述的枯草芽孢桿菌粉劑的制備方法，包括以下步驟：

①種子培養：在種子罐中裝入種子培養基，取斜面菌種制成的枯草芽孢桿菌細胞懸液按1％接種量接入種子罐，30℃，通風量1∶1.2體積比，350rpm，培養8小時；

②發酵培養：在發酵罐中裝入發酵培養基，將種子罐中的菌種培養液流加接種，流加持續5min，接種量10％，30℃，300rpm，通風量1∶0.4體積比，培養8小時；然后提高通風量為1∶0.6體積比，培養12小時；最后改變通風量為1∶0.8體積比，流加5％體積的發酵補料液，持續20min，補料發酵，再培養12～16小時；

③將發酵后的菌液加入占總重量18～25％的改性淀粉、2～5％的斜發沸石粉，攪拌混勻，采用高速離心噴霧干燥機進行噴霧干燥，制成枯草芽孢桿菌酶粉劑。

3.根據權利要求2所述的處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法，其特征在于：步驟①中，所述的種子培養基由蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、瓊脂和蒸餾水組成；步驟②中，所述的發酵培養基由豆粨粉、玉米粉、麩皮、Na₂HPO₄、KH₂PO₄和蒸餾水組成，所述的發酵補料液由蠶蛹、石灰和水按100∶6∶600的重量比例，混合均勻，在1.0×10⁵pa蒸汽壓力下加熱水解1小時，制成。

4.根據權利要求1所述的處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述的種子培養采用種子培養基，其組成為磷酸二氫鉀、氯化鈣、碳酸氫鈉、乙酸鈉、氯化鎂、氯化銨、氯化鈉、酵母粉、微量元素溶液、生長因子、琥珀酸鈉、蛋白胨和蒸餾水組成，其中，微量元素溶液包括四水氯化亞鐵、氯化鈷、氯化鎳、氯化銅、氯化錳、氯化鋅、硼酸、鉬酸鈉、亞硒酸鈉和蒸餾水，生長因子包括生物素、煙酸、鹽酸硫胺素、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆胺、泛酸鈣、維生素B₁₂和蒸餾水；所述的發酵培養基由氯化銨、醋酸鈉、氯化鎂、氯化鈣、磷酸二氫鈣、磷酸氫二鉀、酵母膏和蒸餾水組成。

5.根據權利要求1所述的處理污水污泥的酶菌復合劑的制備方法，其特征在于：步驟(3)ii中，原始工作菌種的培養步驟為：采用葡萄糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碳酸鈣和蒸餾水組成的培養基，先將培養基的pH調至6.5～7.5，再在121℃高溫滅菌20分鐘，待冷卻后，加入占總重量3～5％待分離的污水或污泥，在溫度23～33℃，放置于通風黑暗處培養3～4天，培養液由無色變為黃色，然后再轉接培養3次，獲得黃色菌液。