[發明專利]靶向型PTEN基因復合物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201110145896.9
• 申請日: 2011-06-01
• 公開（公告）號: CN102241777A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 陳宏頡;王守森;鄭兆聰;袁邦青;楊衛忠;石松生;王如密;高進喜;趙琳
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區福州總醫院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/79;C12N15/66;A61K48/00;A61K38/10;A61P35/00;A61K38/08
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種靶向型復合物，特別涉及一種靶向型PTEN基因復合物，還涉及該復合物的制備方法及其在制藥領域的應用。

背景技術

神經膠質瘤是威脅人類健康的重要疾病，其治療方法的研究一直是醫學和生命科學研究的重點。腫瘤的生物治療已被世界醫學界公認為是繼手術、放射治療和化學治療之后的第四大治療方法，其中基因治療更是目前腫瘤生物治療中最活躍的研究領域之一?；蛑委煹脑硎菍⒛康幕蛴没蜣D移技術導入靶細胞，使靶細胞表達此基因而獲得特定的功能，繼而執行或介導對腫瘤的殺傷和抑制作用，從而達到治療之目的。

癌基因激活和抑癌基因失活是目前公認的腫瘤發生的重要分子機制。已發現多種抑癌基因的缺失或突變與神經膠質瘤的發生和發展密切相關。PTEN基因是1997年發現的一種與人類多種腫瘤的惡性增殖與轉移密切相關的抑癌基因。該基因定位于人類第10q23染色體上，具有9個外顯子，含有由1212個核苷酸組成的開放閱讀框，編碼由403個氨基酸組成的蛋白質。有學者檢測了41例原發性膠質母細胞瘤中PTEN基因的表達，結果顯示，59%的標本中存在10q23染色體上PTEN位點的雜合性缺失。也有學者比較了不同病理等級神經膠質瘤中PTEN基因的表達，證實低分化神經膠質瘤中PTEN基因的突變率明顯高于高分化神經膠質瘤，提示PTEN基因的突變有可能導致其抑瘤活性的降低。目前研究認為，PTEN蛋白具有酪氨酸磷酸酶活性，可將磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）轉變為PIP2，而PIP3是胰島素、表皮生長因子等細胞生長因子的信號傳遞分子，可通過蛋白激酶B抑制細胞凋亡以及通過其它效應分子刺激細胞增殖，PTEN蛋白可能是通過減少PIP3而最終誘導細胞凋亡。

在腫瘤基因治療中，為了提高殺傷腫瘤細胞的特異性，尋找腫瘤細胞與正常細胞的差異十分重要。其中，以外源性腫瘤特異性啟動子調控目的基因的表達是一種重要的技術手段。生存素（Survivin）是迄今為止發現的最強的凋亡抑制因子，具有抑制細胞凋亡和維持細胞有絲分裂的雙重功能。Survivin在正常的終末分化組織中幾乎不表達，但在幾乎所有惡性腫瘤組織中高表達，并與疾病的進展、預后密切相關。既往研究已經證實，在肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、神經膠質瘤及黑色素瘤等腫瘤中，Survivin啟動子都具有較強的調控能力，表明Survivin啟動子是一個廣譜的腫瘤特異性啟動子。

HIV-1的反式激活蛋白Tat能主動穿過細胞膜進入細胞內部，并且，Tat能將與之連接的多肽、蛋白質及DNA等以濃度依賴的方式高效、快速地導入細胞內，而細胞的正常結構和功能不受影響。由于Tat蛋白具有這種穿膜活性，使得目的分子能被簡單高效地引入細胞。

血管內皮細胞生長因子（vascular?endothelial?growth?factor,?VEGF）是促進內皮細胞生長作用最強、特異性最高的一種因子。大量研究表明，VEGF在促進新生血管生成，特別是在促進神經膠質瘤生長及轉移中起著重要作用。神經膠質瘤組織中VEGF的表達水平與腫瘤的血管化程度、惡性程度呈正相關；VEGF陽性表達與患者的生存時間具有顯著的相關性。文獻報道，噬菌體12肽VASAVFYSALVE（又稱為VEGF受體結合抑制肽）呈劑量依賴性競爭抑制VEGF誘導的內皮細胞生長，其可能模擬了VEGF?的空間結構表位而與其受體位點結合，從而阻斷了VEGF與其受體KDR的作用。

但迄今為止，國內外尚未見涉及PTEN基因、Survivin啟動子、穿膜肽Tat49-57及上述VEGF受體結合抑制肽的復合物的相關報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種靶向型PTEN基因復合物，通過腫瘤特異性啟動子控制PTEN基因的表達，使PTEN基因能選擇性地表達于腫瘤細胞中，從而準確殺傷腫瘤細胞，盡量減少正常組織的損傷。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

靶向型PTEN基因復合物，由穿膜肽Tat49-57和VEGF受體結合抑制肽的融合肽與PTEN基因重組真核表達載體復合而成，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，所述PTEN基因重組真核表達載體由Survivin啟動子調控PTEN基因的表達。

進一步，所述PTEN基因重組真核表達載體為pcDNA3.1-SurvivinP-PTEN。?

本發明的目的之二在于提供一種所述靶向型PTEN基因復合物的制備方法。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：