[發明專利]一種可溶性B7-H1定量檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201110144895.2
• 申請日: 2011-05-31
• 公開（公告）號: CN102250911A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 陳永井;王勤;張學光;施敏驊;胡振華
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明涉及一種可定量檢測可溶性B7-H1的試劑盒，具體涉及利用兩株特異性抗人B7-H1單克隆抗體ZH11、10D7以及B7-H1Ig融合蛋白研制用于定量檢測分析可溶性B7-H1因子的酶聯免疫檢測試劑盒的方法，該定量檢測體系可應用在肺癌鑒別診斷和預后判斷領域。

背景技術

已知有許多受體/配體相互作用都參與誘導、建立和調節抗原特異性免疫反應。為了有效地激活T細胞反應，通常至少需要兩個信號。其中除T細胞抗原受體（TCR）識別抗原提呈細胞（APC）上的MHC-抗原復合物以提供第一信號即抗原特異性信號外，還必須獲得T細胞與APC表達的共刺激分子相互作用后產生的第二信號。第二信號即為共刺激信號或協同刺激信號。如果僅有抗原特異性信號而缺失共刺激信號，T細胞將表現為無反應或免疫耐受狀態，甚至導致凋亡。可見，共刺激信號是T細胞克隆擴增、分化和發揮生物效應所必不可少的。因此，第一信號決定了T細胞活化的特異性，而第二信號則決定T細胞介導的免疫應答能否有效進行。

近年來，分子生物學技術廣泛應用于免疫學研究，共刺激分子被不斷發現。根據其結構，這些共刺激分子可分為兩類：一類是腫瘤壞死因子/腫瘤壞死因子受體超家族，包括CD40/CD154、CD27/CD27L、CD30/CD30L、4-1BB/4-1BBL和Fas/FasL等。另一類是免疫球蛋白超家族，如B7/CD28、LAF1/ICAM-1、ICOS-GL50、PD-1/B7-H1、BTLA/HVEM和CD2/LFA-3等。這些協同刺激分子以受體/配體相互作用的方式傳導信號。受體/配體一般表達在不同的免疫細胞表面，通常一個為持續性表達，一個呈誘導性表達的特征。在免疫應答的不同階段，這些分子以各自獨特而又相關聯的方式參與信號傳導，共同調控機體的免疫反應有效啟動、適度應答和適時終止。

PD-1（CD279）是由288個氨基酸組成的免疫球蛋白超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白，被認為與細胞凋亡相關而命名為程序性死亡-1（programmed?death-1，PD-1）。研究發現，PD-1分子主要在T、B、NK細胞表面呈誘導性上調表達，未成熟的T、B細胞在胸腺和骨髓內發育的特定階段也有弱表達，PD-1分子C末端的酪氨酸殘基可與下游的SHP-1、SHP-2等信號轉導分子作用而抑制免疫細胞的進一步活化。B7-H1（B7-H1，CD274）是PD-1的兩個配體之一，與B7家族其它成員一樣，在蛋白結構上B7-H1分子包含有IgV樣區、IgC樣區、跨膜區和一個短而保守的胞漿區尾部。B7-H1胞外區有4個保守的半胱氨酸殘基，參與Ig樣結構中二硫鍵的形成，保持正確的空間結構。B7-H1的mRNA不僅表達在實質器官組織，如：心臟、肺、肝和胎盤等，部分抗原遞呈細胞上也有適度表達，如：活化的B細胞和樹突狀細胞；在胸腺上皮細胞和多種上皮性來源的腫瘤細胞株上B7-H1?mRNA呈高表達。蛋白水平上，B7-H1在活化的T、B、單核細胞和多種類型的腫瘤細胞（如：肺癌、肝癌、乳腺癌和鱗狀細胞癌等）上誘導性表達。大量的研究表明，B7-H1與活化的T細胞上PD-1相互作用可顯著抑制效應性T細胞的生物學功能，PD-1或B7-H1的表達改變導致PD-1/PD-L抑制途徑發生異常，進而引發機體產生免疫功能亢進/低下性疾病。

Dong?H等研究發現，低劑量的激發型抗CD3單抗與B7-H1Ig聯合應用可有效刺激T細胞的增殖，促進IL-10的分泌，這種正性刺激作用呈IL-2依賴性，對小鼠B7-H1的研究也獲得了類似的結果。但后來更多的研究表明，B7-H1能與其負性受體PD-1相互作用抑制T細胞的增殖和活化，尤其能顯著降低IL-2、IFN-γ和IL-10的分泌。B7-H1對T細胞功能的影響主要依賴于TCR和CD28信號的強度，在亞適量TCR信號刺激下，B7-H1對T細胞增殖的抑制作用明顯，而在最適量TCR信號時，僅在沒有CD28協同刺激信號的條件下才對T細胞增殖發揮促進作用，PD-1/B7-H1抑制途徑所介導的效應可被CD28信號或IL-2逆轉。因此，PD-1/B7-H1負性信號可顯著抑制T細胞的活化增殖和細胞因子的產生。