[發(fā)明專利]一個(gè)新的丙型肝炎病毒抗原表位

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110143403.8
• 申請(qǐng)日: 2011-05-31
• 公開（公告）號(hào): CN102212114A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈戰(zhàn)生;李端;潘蕾;周云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;A61K38/08;A61K39/29;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責(zé)任公司 61108
• 代理人: 張培勛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物信息學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)，預(yù)測(cè)了一個(gè)新的丙型肝炎病毒抗原表位，初步的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證明這個(gè)抗原表位具有免疫原性。

背景技術(shù)

丙型肝炎病毒（HCV）是引起慢性肝病的主要病原體之一，全世界約有HCV感染者1.7?億-2.0億，我國(guó)人群HCV感染率約3.2%，估計(jì)全國(guó)感染者在4000?萬(wàn)以上。HCV感染后，約50%?-85%轉(zhuǎn)為慢性肝炎，其中20%-30%發(fā)展為肝硬化，部分轉(zhuǎn)為肝細(xì)胞肝癌（HCC），嚴(yán)重危害人類健康，已成為全球性的、嚴(yán)峻的公共衛(wèi)生問(wèn)題。迄今為止，尚缺乏理想的抗病毒治療措施，干擾素治療也不太令人滿意。由于HCV病毒變異率高，以保護(hù)性中和抗體為主的預(yù)防性HCV疫苗的研究步履維艱，因此，尋求抗HCV的疫苗和有效抗病毒藥物一直是研究的熱點(diǎn)。

HCV基因組有9.6kb，編碼3010aa的多肽，由結(jié)構(gòu)蛋白（Core、E1和E2）和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）組成。HCV感染后，機(jī)體細(xì)胞模式識(shí)別受體（pattern??recognition?receptors，PRR）感受外來(lái)分子的侵入，誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，產(chǎn)生I類干擾素等固有免疫反應(yīng)，以抵抗病毒的侵襲；同時(shí)通過(guò)DC介導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫，清除病毒感染，恢復(fù)細(xì)胞的“健康狀態(tài)”。對(duì)急性HCV?感染病人觀察發(fā)現(xiàn)，如病人能早期出現(xiàn)針對(duì)包膜蛋白的抗體,則有利于病毒清除。早期疫苗研究中也證明了HCV?確實(shí)具有中和抗原表位,用真核載體表達(dá)的重組膜蛋白免疫黑猩猩,可以保護(hù)動(dòng)物免受同株病毒的攻擊。由于HCV中和抗原表位存在于編碼包膜糖蛋白的E區(qū)，而HCV?E區(qū)基因高度變異，尤其是E2區(qū)N端存在高變區(qū)（HRV1和HRV2），從而使機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體因抗原變異而缺乏保護(hù)力，不能有效地清除病毒準(zhǔn)種或其它型別病毒株的感染。

近年來(lái),?應(yīng)用更特異的ELISPOT法檢測(cè)免疫活性細(xì)胞在特異性表位肽刺激下的細(xì)胞因子分泌,分別觀察CD4+?Th細(xì)胞和CD8+?CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，早期有強(qiáng)烈Th?免疫反應(yīng)的病人,HCV病毒檢查陰轉(zhuǎn),若Th?免疫反應(yīng)下降,病毒血癥又可復(fù)發(fā),說(shuō)明Th細(xì)胞免疫反應(yīng)在病毒清除中的重要作用。最近有研究發(fā)現(xiàn)，HCV感染的患者若能在感染的早期產(chǎn)生較強(qiáng)的針對(duì)HCV各個(gè)蛋白的多表位特異性CTL，則患者的感染多表現(xiàn)為自限性；而當(dāng)患者特異性CTL的活性較低或僅針對(duì)個(gè)別表位時(shí)，則可導(dǎo)致HCV感染的持續(xù)狀態(tài)，并可造成肝組織的慢性損傷，提示CTL活性對(duì)HCV感染的控制具有重要作用。黑猩猩感染實(shí)驗(yàn)?zāi)芨屑?xì)地觀察初次感染時(shí)不同時(shí)相的免疫反應(yīng)，結(jié)果說(shuō)明CD4+?T細(xì)胞和CD8+?T細(xì)胞均在HCV清除和維持病毒抑制狀態(tài)中發(fā)揮重要作用。

由于HCV疫苗研究的必要性和迫切性,自1989?年HCV基因獲得克隆以來(lái),人們一直在致力于疫苗的研究,但是進(jìn)展緩慢。早些時(shí)候，人們注重發(fā)展HCV包膜糖蛋白或多肽亞單位疫苗，同HIV?疫苗的研究一樣，由于HCV包膜糖蛋白高度的變異特性，使以產(chǎn)生中和性抗體控制病毒感染和復(fù)制的研究遇到困難。HCV疫苗難以實(shí)現(xiàn)的主要原因歸納為以下三點(diǎn):?①?HCV基因組變異率較高，病毒準(zhǔn)種多，缺乏保護(hù)性抗體，不能預(yù)防黑猩猩和人類再次感染，傳統(tǒng)的預(yù)防性疫苗的研究遇到困難；②?HCV復(fù)制能力差，感染力弱，使體內(nèi)病毒滴度較低，在體外又不易培養(yǎng),病毒復(fù)制感染過(guò)程及發(fā)病機(jī)制仍不清楚，而且HCV?編碼的某些蛋白,如核心蛋白和NS蛋白還可能與HCV的致癌性有關(guān),免疫原的選擇以及強(qiáng)度均受到一定的限制；③?缺乏理想的體外感染細(xì)胞模型,動(dòng)物模型除黑猩猩外,其他動(dòng)物,即使靈長(zhǎng)類動(dòng)物,如狒狒、恒河猴等都不能為HCV?所感染，限制了對(duì)疫苗評(píng)價(jià)的研究。近10年來(lái)，HCV疫苗研究的焦點(diǎn)主要集中在核酸疫苗、病毒載體疫苗、重組多表位疫苗以抗原遞呈細(xì)胞為載體的DC疫苗等。