[發明專利]葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法

有效

• 申請號: 201110142214.9
• 申請日: 2011-05-30
• 公開（公告）號: CN102323401A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 劉穎冰;陸梅生;劉中令
• 申請（專利權）人: 上海北加生化試劑有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 林煒

技術領域

本發明生物工程領域，尤其涉及一種試劑盒及其制備方法，特別是一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

類風濕性關節炎(RA)是一種最常見的自身免疫性疾病，在全世界大約有1.0％的人患有此病。其特征為對稱性的大小關節滑膜的炎癥。起初的癥狀包括批關節腫脹疼痛，并且在關節部位有晨僵，繼而引起骨質破壞。因而，RA的早期診斷和及時開始合適的治療對控制該病的病情非常重要。中小型醫院的類風濕關節炎(RA)患者就診人數量少，檢測樣品少，檢測報告周期長，容易延誤患者明確診斷和用藥治療。

類風濕性關節炎(RA)患者和約64％的健康人群與類風濕關節炎未控制的患者在血清中和關節腔積液內存在葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)。主要有體內T細胞系統和B淋巴細胞系統產生，分泌大量GPI抗原進入血清和關節腔內，使得血清中和關節腔內GPI濃度升高，是類風濕關節炎獨特的自身免疫生理功能。在RA患者有高效價的GPI存在，常伴有嚴重的關節功能受限。提示預后不良或治療過程中藥物沒有起到一定作用，當RA患者用藥物治療好轉，血清和關節腔積液中GPI降低，關節腫痛減輕。從2001年Nature?Immunology雜志首次發表文章，從鼠自然生成類風濕關節炎的k/BxNT細胞神經未稍細胞基因中得到GPI，然后從人類類風濕關節炎(RA)中也得到相同的GPI，而且在類風濕關節炎所含高濃度抗原都是一致，幾乎完全為GPI同一酵素酶。

發明內容

本發明的目的在于提供一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法，所述的這種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法是采用膠體金滲濾法和層析法原理來檢測人血清中的GPI濃度，解決了現有技術中檢測血清中的GPI濃度的時間較長，程序復雜的技術問題。

本發明提供了一種葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原體外檢測試劑盒，包括檢測板、羊抗GPI抗體、由膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物、封閉液、洗滌液、陽性參考品和陰性參考品。

進一步的，所述的檢測板由一個塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中設置有一層吸水層，所述的吸水層上設置有一層硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上設置有一個塑料盒面蓋，所述的塑料盒面蓋中央設置有一個檢測反應孔，在檢測反應孔對應的硝酸纖維素膜上點加羊抗GPI抗體。

進一步的，所述的檢測反應孔為圓形或者其它形狀。

進一步的，所述的封閉液是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽溶液，磷酸鹽溶液的pH7.0～7.5之間，牛血清白蛋白在磷酸鹽溶液中的重量百分比為1.0％。

進一步的，所述的洗滌液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH7.0～7.5之間，Tween-20在Tris-HCl溶液中的重量百分比為0.05％。

進一步的，在每毫升膠體金結合物中，羊抗GPI抗體的質量為0.025毫克。

進一步的，所述的陽性參考品為濃度大于0.2mg/L的GPI抗原。

進一步的，所述的陰性參考品小于0.2mg/L的GPI抗原。

本發明還提供了上述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原體外檢測試劑盒的制備方法，包括一個配制羊抗GPI抗體溶液的步驟，一個制備檢測板的步驟，一個制備膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物的步驟，一個配制封閉液的步驟，一個配制洗滌液的步驟，一個制備陽性參考品的步驟和一個制備陰性參考品的步驟。

本發明的工作原理是：本試劑盒采用雙抗體夾心免疫吸附法原理、及膠體金滲濾、膠體金層析檢測技術檢測人血清中的GPI抗原，將羊抗GPI抗體包被于硝酸纖維素膜，制成固相抗體，用以捕獲人血清中可能存在的GPI抗原，再將羊抗GPI抗體標記于膠體金，形成膠體金結合物作為示蹤物。如被測人血清中含有GPI抗原，則形成固相羊抗GPI抗體-GPI抗原-膠體金結合物，呈紅色斑點反應，其顏色深淺與被測血清中含有的GPI抗原的濃度有關，但不呈比例關系。

本發明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發明可以用于檢測人血清樣本中葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原，作為類風濕性關節炎輔助診斷使用。采用本發明的試劑盒當天能收到檢測報告，檢測結果準確而且方便。

附圖說明

圖1顯示了檢測板反應孔中心檢測點有紅色斑點，為陽性結果。

圖2顯示了檢測板反應孔中心檢測點無紅色斑點，為陰性結果。

具體實施方式

實施例1.膠體金制備條件選擇：

1.10.05％氯化金溶液300毫升，加熱至沸；