[發明專利]一種利用離子束生物工程誘變微藻生產二十二碳六烯酸的方法

無效

• 申請號: 201110138270.5
• 申請日: 2011-05-26
• 公開（公告）號: CN102220307A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 姚黎明
• 申請（專利權）人: 武漢中科光谷綠色生物技術有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;C12P7/64;C12R1/89
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1.一種利用離子束生物工程誘變微藻生產二十二碳六烯酸的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)化學誘變：選擇隱甲藻作為出發藻種，按照常規方法經過斜面培養，接種子瓶在25℃培養室培養，把培養三天左右的種液中的微藻用人造海水溶液稀釋，稀釋度控制在100倍以內；

2)離子束誘變：把經上述處理過的藻液均勻涂布在無菌空白培養基上，加20-30％甘油保護，用無菌風風干，再將涂布有微藻的平板放置入離子注入機靶室內進行離子注入；

3)離子注入完成后，使用固體培養基進行單藻篩選，以搖瓶培養的二十二碳六烯酸產率為標準，以高出對照組10％-20％的搖瓶中挑選高產藻種，反復多次進行離子注入誘變和選育，以二十二碳六烯酸產率大于2g/L，即獲得用離子束生物工程誘變的高產藻種。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)包括如下步驟：將稀釋所得到的微藻懸浮液按照特定比例與化學誘變劑亞硝基胍溶液混合，在25℃-30℃處理20-30分鐘；然后在離心機中離心5分鐘，去掉上清液，再加入人造海水。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟2)中靶室內的真空度大概在1x10^-2乇-1x10^-3乇；以N⁺為注入離子，離子注入能量為5-10Kev，注入劑量為2.5×10¹⁴-5×10¹⁴N⁺/cm²。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述亞硝基胍溶液的濃度為0.1g/L-0.3g/L，化學誘變劑與微藻懸浮液的體積比例為1∶10。