[發明專利]一種酶聯檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201110134682.1
• 申請日: 2011-05-24
• 公開（公告）號: CN102323421A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 鄒檢平
• 申請（專利權）人: 北京健平九星生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種酶聯檢測試劑盒，其組成為：

酶聯板、陽性對照、陰性對照、樣品稀釋液、酶聯物、濃縮洗滌液、顯色劑A＆B、終止液和封板膠紙；

其中：

酶聯板為血管內皮細胞生長因子單克隆抗體包被的酶聯反應板；

酶聯物為辣根過氧化物酶標記血管內皮生長因子多克隆抗體?。

2.權利要求1的試劑盒，其特征在于：

陽性對照為血管內皮細胞生長因子蛋白凍干粉；

陰性對照為動物血清凍干粉；

樣品稀釋液為0.05%吐溫-20,?1%牛血清白蛋白，10mM乙二胺四乙酸二鈉，0.05%硫柳汞，0.4M?NaCl，pH6.5;

濃縮洗滌液為137mM?NaCl，2.7?mM?KCl,?10mM?Na₂HPO₄，2?mMKH₂PO_4?,?0.05%吐溫-20,?Ph7.4；

顯色劑A、B，其中A液為H₂O₂溶液，B液為3，3^＇,5?,5^＇-四甲基聯苯胺溶液；

終止液為2MH₂SO_4?。

3.權利要求1的試劑盒，其特征在于，各物質的量以酶聯板的孔數為標準。

4.權利要求1的試劑盒，其特征在于，所述酶聯板為96孔。

5.上述試劑盒的制備和操作方法，主要步驟為：

（a）將血管內皮細胞生長因子單克隆抗體包被于固體支持物酶聯反應板上；

（b）用封閉液封閉；

（c）將生物標本加入到預包被的酶聯反應板反應孔中，生物標本中的血管內皮細胞生長因子特異地與血管內皮細胞生長因子單克隆抗體結合；

（d）用血管內皮細胞生長因子多克隆抗體檢測血管內皮細胞生長因子；

（e）顯色底物為3，3^＇,5?,5^＇-四甲基聯苯胺溶液。

6.權利要求5的方法，其特征在于，步驟a所述的單克隆抗體是用血管內皮細胞生長因子免疫小鼠所得。

7.權利要求5的方法，其特征在于，步驟c所述的生物標本為癌癥、血管病、糖尿病視網膜病及類風濕關節炎的血清、血漿、腦脊液、唾液、組織提取液或尿液。

8.權利要求5的方法，其特征在于，步驟d所述的血管內皮細胞生長因子多克隆抗體制備用的血管內皮細胞生長因子用昆蟲細胞表達并用Ni柱純化。

9.權利要求5的方法，其特征在于，步驟d所述的多克隆抗體是用血管內皮細胞生長因子免疫家兔所得。

10.權利要求5的方法，其特征在于，步驟d所述的多克隆抗體用辣根過氧化物酶標記。

11.權利要求6的方法，其特征在于，所述的血管內皮細胞生長因子用昆蟲細胞表達并用Ni柱純化。