[發明專利]一種食品中副溶血弧菌和霍亂弧菌的合檢方法

無效

• 申請號: 201110134449.3
• 申請日: 2011-05-13
• 公開（公告）號: CN102242182A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 沈飚;胡興娟;汪云泉;徐君輝;貝文聯;陶海波
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國舟山出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種食品中副溶血弧菌和霍亂弧菌的合檢方法。?

背景技術

海產品中主要微生物污染的弧菌包括副溶血弧菌、霍亂弧菌等。國內對于副溶血弧菌和霍亂弧菌的傳統檢驗方法是依據各自的標準進行單獨檢驗，檢驗工作繁瑣而且效率較低。現在雖已有比較先進的快速分子生物學檢測方法，但該方法的檢測要求比較高，檢測成本昂貴，一般不適合在基礎檢測實驗室中應用。?

現有一種申請號為200610068561.0名稱為《食品中霍亂弧菌、副溶血弧菌和擬態弧菌的PCR檢測方法》中國發明專利公開了一種檢測方法，其特征在于：其檢測步驟為：待檢測的樣品經二次增菌后，采用水煮法提取弧菌基因組DNA，然后經PCR反應后，再經電泳、染色、漂洗，最后用凝膠成像儀觀察結果并拍照，最后經過譜圖分析即可得出檢測結果。該發明的優點在于：可同時檢測食品中的霍亂弧菌、副溶血弧菌和擬態弧菌，可以在不影響檢出率的條件下加快檢測速度，減少工作量。但其缺點是檢測工藝復雜，操作難度大，且檢測成本高，所以該檢測方法還有待于改進。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種檢測工藝簡單、操作方便、通過利用弧菌的共性能同時對副溶血弧菌和霍亂弧菌兩種弧菌合檢的方法。?

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：本食品中副溶血弧菌和霍亂弧菌的合檢方法，其特征在于：依次包括以下步驟：?

一、配制測試液：對固體或半固體被檢物的測試液配制步驟為：在無菌操作下稱取固體或半固體被檢物的樣品，放入到裝有氯化鈉和蛋白胨水混和液的無菌容器中，樣品的質量與混和液的體積比為1比9，然后加入試劑調節混和液的pH值至8.4，搖勻后備用；如果被檢物是液體，對液體被檢物測試液配制步驟為：用無菌吸管吸取樣品，放入到裝有氯化鈉和蛋白胨水混和液的無菌容器中，樣品的體積與混和液的體積比為1比9，然后加入試劑調節混和液的pH值至8.4，搖勻后即制成測試液；所述氯化鈉和蛋白胨水的混和液配比為：每100ml的蒸餾水中含蛋白胨為2g，含氯化鈉為2.1g；所述樣品的質量與混和液的體積比為1比9，是指質量以克為單位，體積以毫升為單位。?

二、增菌培養：測試液中的樣品為凍品的，將測試液放置于溫度為35～37℃中進行增菌培養6～24小時；如果測試液中的樣品為新鮮的，將測試液放置于溫度為40.5～42.5℃中進行增菌培養6～24小時；?

三、分離培養：將增菌培養至6～24小時的測試液接種至弧菌顯色反應培養基中，在溫度為35～37℃中培養18～24小時，檢查顯色反應培養基上是否呈現有可疑的副溶血弧菌顏色的菌落或/和霍亂弧菌顏色的菌落；?

四、鑒定結論：選取可疑顏色的菌落，用無菌的生理鹽水制備成菌懸液，通過生化鑒定物對該樣品是否帶有副溶血弧菌和霍亂弧菌作出鑒定，如果鑒定結果沒有發現副溶血弧菌和霍亂弧菌的，給出未檢測出副溶血弧菌或霍亂弧菌的結論；如果鑒定結果發現有副溶血弧菌或/和霍亂弧菌的，給出檢測到副溶血弧菌或/和霍亂弧菌的結論，并進入血清學試驗：即將檢測到的副溶血弧菌或/和霍亂弧菌各自進行血清學檢驗，然后給出檢驗結果。?

作為改進，所述步驟一中對固體或半固體被檢物的測試液配制步驟為：對固體或半固體樣品在無菌操作下稱取25g樣品，放入到裝有225ml氯化鈉和蛋白胨水混和液的無菌容器中，然后將無菌容器在8000轉/分勻速搖動1～2分鐘或者以每秒6～9次輕拍無菌容器的方式拍擊1分鐘，接著加入堿性或酸性試劑調節混和液的pH值至8.4，即制成測試液。?

再改進，所述堿性試劑可優選為氫氧化鉀或氫氧化鎂。?

再改進，所述酸性試劑可優選為鹽酸、稀硫酸或磷酸。?

再改進，所述權利要求1步驟三中的分離培養的具體方法為：將增菌6～8小時和18～24小時的測試液分別接種于弧菌顯色反應培養基中，并在溫度為35～37℃中培養18～24小時；副溶血弧菌在弧菌顯色反應培養基上呈現粉紅色菌落，霍亂弧菌在弧菌顯色反應培養基上呈現藍色或者藍綠色菌落，如果在顯色反應培養基上發現有粉紅色菌落或藍色或藍綠色顏色的菌落，則說明所述樣品中帶有可疑的副溶血弧菌或霍亂弧菌，如果在顯色反應培養基上均發現有粉紅色菌落和藍色的菌落、或者發現有粉紅色菌落和藍綠色顏色的菌落時，則說明所述樣品中既帶有可疑的副溶血弧菌又帶有可疑的霍亂弧菌。?