[發(fā)明專利]西紅花干品的DNA指紋圖譜鑒定方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110132089.3
• 申請日: 2011-08-05
• 公開（公告）號: CN102220432A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設計）人: 蘇薇薇;楊翠平;鄭漢杰;蘇暢
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

1.一種西紅花干品的DNA指紋圖譜鑒定方法，其特征在于：采用以下三個物質中的任一種作為鑒定引物：?

（1）UBC868:?GAAGAAGAAGAAGAA,如SEQ?ID?NO:1所示；

（2）UBC859:?TGTGTGTGTGTGTGTGAC，如SEQ?ID?NO:2所示；

（3）UBC818:?CACACACACACACACAG，如SEQ?ID?NO:3所示。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于該方法的步驟包括：

（1）.取西紅花干品藥材，提取DNA；

（2）.建立PCR反應體系：在PCR管中建立反應體系，反應體系包括10×PCR的緩沖液，2.5mmol/L?dNTP，高保真TaqDNA聚合酶，模板DNA?，無菌雙蒸水，鑒別引物為UBC868:?GAAGAAGAAGAAGAA或UBC859:?TGTGTGTGTGTGTGTGAC或UBC818:CACACACACACACACAG；

（3）.電泳圖譜對照：采用瓊脂糖凝膠電泳法，其中膠濃度為1.2%，膠中加入核酸凝膠染色劑，電泳結束后，取凝膠片在凝膠成像儀上檢視；供試品凝膠電泳圖譜中，在與對照藥材電泳圖譜相應位置上應有相同DNA條帶。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，該方法的具體步驟為：

（1）.取西紅花干品藥材，提取DNA；

（2）.建立PCR反應體系：在200μL?PCR管中進行，反應總體積為25μL，反應體系包括10×PCR緩沖液2.5μL，2.5mmol/L?dNTP?2μL，鑒別引物10?μmol/L?2μL，高保真TaqDNA聚合酶（5U/μL）0.125μL，模板DNA?2μL，無菌雙蒸水16.375μL,鑒別引物為UBC868:?GAAGAAGAAGAAGAA或UBC859:?TGTGTGTGTGTGTGTGAC或UBC818:CACACACACACACACAG；

（3）.電泳圖譜對照：按照瓊脂糖凝膠電泳法，膠濃度為1.2%，膠中加入核酸凝膠染色劑，供試品與對照藥材PCR反應液的上樣量均為5μL，DNA分子量標記上樣量為3μL?(100μg/μL)；電泳結束后，取凝膠片在凝膠成像儀上檢視，供試品凝膠電泳圖譜中，在與對照藥材電泳圖譜相應位置上應有相同DNA條帶。

4.如權利要求1、2或3所述的方法在西紅花飲片鑒定、含西紅花干品組分的中藥制劑鑒定中的應用。