[發明專利]與豬血液參數性狀相關的microRNA分子標記及應用

無效

• 申請號: 201110122355.4
• 申請日: 2011-05-12
• 公開（公告）號: CN102776178A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 李新云;李聰聰;何華斌;趙書紅;曹建華;朱猛進;李長春;余梅
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發明屬于家畜基因工程技術領域，具體涉及一種作為豬標記輔助選擇的與血液參數(免疫)性狀相關的microRNA分子標記的克隆及應用。?

背景技術

MicroRNAs(miRNAs)為一類大小約22個堿基通過與其靶mRNA結合而誘導轉錄后基因沉默的小RNA(Bartel?et?al.，2004；Kim?et?al.，2005)。哺乳動物中miRNA的加工過程可分為多步。起先，大部分miRNA通過RNA聚合酶II(RNA?polymerase?II)轉錄成一條長的原初轉錄物(pri-miRNA)(Lee?et?al.，2004)，隨后，pri-miRNA被由III型RNA核酸酶Drosha和雙鏈RNA結合蛋白DGCR8組成的微處理復合體切割成大小為70～80nt的前體miRNA(pre-miRNA)(Lee?et?al.，2003；Gregory?et?al.，2004；Denli?et?al.，2004)。接著由核輸出蛋白Exportin-5及協同作用因子Ran-GTP一起將發夾前體miRNA轉運出核(Yi?et?al.，2003；Lund?et?al.，2004；Bohnsack?et?al.，2004)。在細胞質中，前體miRNA被另一個III型RNA核酸酶Dicer切割形成雙鏈miRNA復合體。隨后解旋，其中一條成為成熟miRNA進入核糖蛋白復合體，形成RNA干擾沉默復合體(RISC)(Preall?et?al.，2005)。在RISC中，miRNA通過兩種方式調節靶基因的表達，如果其與靶基因3′UTR完全互補，則使其降解；若不完全互補結合，則阻礙其翻譯。?

體內miRNA的生物合成受到嚴密的調控，存在于pri-miRNA、pre-miRNA及成熟miRNA序列上的突變會不同程度地影響最終成熟miRNA的生成。在哺乳動物中，miRNA作為內源性阻遏物，通過結合靶mRNA的3′UTR區阻遏編碼基因的翻譯。由于在靶位點序列上存在的SNP可影響miRNA的調控作用，靶位點自然產生的SNP是miRNA功能研究的重點對象(Saunders，et?al.2007)。?

近年來越來越多的研究發現，編碼合成人類miRNA的基因(包括miRNA原始轉錄本pri-miRNA，miRNA前體pre-miRNA和成熟miRNA)以及miRNA的靶基因結合序列內也存在SNP(Duan，et?al.2007)。Duan等研究has-miR-125a基因時發現，該基因位點也存在SNP，從而含miR-125a-G和miR-125a-U兩種等位的miR-125a，其中miR-125a-U能顯著影響DGCR8與pri-miRNA-125a的結合和剪接，使成熟的miR-125a生成減少，使miR-125a對靶基因Lin-28的翻譯抑制作用減弱(Duan，et?al.2007)。Sethupathy等研究發現，位于AGTR1基因has-miR-155結合位點下游的SNP(rs5186)可影響與has-miR-155的結合，has-miR-155對該位點為A等位的AGTR1?mRNA的結合能力增強，對AGTRI基因表達的下調作用更明顯，而該位點為C等位的AGTR1?mRNA表達不受has-miR-155影響(Sethupathy，et?al.，2007)。?

miRNA在免疫調節中的扮演十分重要的角色，相比于損傷相關分子模式的microRNA，miR-155是與病原相關分子模式相關的miRNA(Hideho?Okada，2010)，而且miR-155作為一個原癌基因(Tam?et?al.，1997)，在多種腫瘤中高表達。miR-155功能廣泛，它參與造血、炎癥和免疫等許多生物過程(Isabella?Faraoni，etal.，2009)。BIC/miR-155在維持免疫系統正常功能及穩態中發揮重要作用(Rodriguez，et?al.，2007)。人與小鼠mir-155分別定位于各自基因組的第21號、16號染色體上，均來源于一條非編碼長鏈RNA，BIC(B-cellIntegration?Cluster)。BIC最初被鑒定為存在于由禽類白血病病毒誘導的B淋巴細胞癌的一個常見逆轉錄病毒整合位點上的基因，它可被插入的啟動子活性激活轉錄(Tam?et?al.，1997)。2005年Eis等發現miR-155由bic?RNA經加工剪切而產生，bic共包含三個外顯子，而miR-155的前體存在于第三個外顯子中(小鼠?miR-155前體起始于第三個外顯子的第88nt)(Eis?et?al.，2005)。?