[發(fā)明專利]一株兼防煙草野火病和角斑病的枯草芽孢桿菌

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110120964.6
• 申請日: 2011-05-11
• 公開（公告）號: CN102286395A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫劍萍;孫宏偉;郭兆奎;虞艷芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國煙草總公司黑龍江省公司牡丹江煙草科學(xué)研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P1/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株兼防煙草野火病和角斑病的枯草芽孢桿菌，屬于微生物領(lǐng)域。

背景技術(shù)

煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。煙草野火病和角斑病是煙草主要的細(xì)菌性病害，在世界各煙區(qū)均有發(fā)生，目前的植煙品種中對兩病害均無抗性，因此病害的流行在逐年加重，每年均造成比較嚴(yán)重的損失。

該病害的防治方法主要以化學(xué)農(nóng)藥為主,?但長期使用化學(xué)農(nóng)藥，造成煙葉農(nóng)藥殘留的增加和污染環(huán)境等問題，導(dǎo)致煙田生態(tài)系統(tǒng)的不穩(wěn)定和嚴(yán)重惡化，病蟲的抗性增加，危害更加猖獗。因此發(fā)展綠色生物農(nóng)藥是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要，也是全球農(nóng)業(yè)發(fā)展的趨勢和走向。

煙草行業(yè)“無公害煙葉”、“減害降焦”工程要求重視化學(xué)農(nóng)藥的潛在危險和危害，研究符合環(huán)保、健康，可持續(xù)發(fā)展理念的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境相容的生物農(nóng)藥，來緩解和改變化學(xué)農(nóng)藥所導(dǎo)致“三R”(Residue,?Resistance,?Resurgence)問題，促進(jìn)煙草行業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一株無公害且對煙草兩大細(xì)菌性病害野火病和角斑病均具有顯著防效的枯草芽孢桿菌。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一株枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis），命名為NYJ-02，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）的一個株系，是從煙草葉際分離得到，已于2011年1月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101），其保藏編號為?CGMCC?No.4555。

本發(fā)明還提供一種由保藏編號為CGMCC?No.4555的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）NYJ-02制備的菌劑。該菌劑的優(yōu)選使用濃度為18.0×10⁸cfu/mL。該菌劑可以通過現(xiàn)有技術(shù)中的制備方法來制備，還可以根據(jù)需要，添加可接受的輔料。

為了更加詳細(xì)地說明本發(fā)明所述菌劑的制備，本發(fā)明提供了一種所述枯草芽孢桿菌菌劑的優(yōu)選的制備方法，該方法包括以下步驟：

（1）菌種活化：將保藏號為CGMCC?No.4555的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）NYJ-02接種于斜面培養(yǎng)基上，于26℃~28℃條件下培養(yǎng)2~3天；

（2）種子培養(yǎng)：從斜面培養(yǎng)基上挑取單菌落接入種子培養(yǎng)基中，于26℃~28℃條件下培養(yǎng)16~18小時，制得種子液；

（3）發(fā)酵培養(yǎng)：按4~5%的接菌量，將所述種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于26℃~28℃條件下培養(yǎng)3天，即得所述的枯草芽孢桿菌的菌劑。

上述方法中涉及的各種培養(yǎng)基均可以是現(xiàn)有技術(shù)中適于枯草芽孢桿菌生長的培養(yǎng)基。本發(fā)明也提供一種優(yōu)選的培養(yǎng)基配方，即：

所述斜面培養(yǎng)基組分及配比為：酵母膏6.25?g，蛋白胨3.75?g，葡萄糖1.0?g，NaCl?3.0?g，KNO_3?5.0?g，瓊脂粉15.0?g，加蒸餾水定容至1000?mL，pH為7.0~7.5，121?℃下高溫蒸汽滅菌30?min。

所述種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基組分及配比：為酵母膏6.25?g，蛋白胨3.75?g，葡萄糖1.0?g，NaCl?3.0?g，KNO_3?5.0?g，加蒸餾水定容至1000?mL，pH為7.0~7.5，121?℃下高溫蒸汽滅菌30?min。

本發(fā)明還提供了所述枯草芽孢桿菌NYJ-02或所述菌劑在制備防治煙草角斑病藥物中的應(yīng)用。??

本發(fā)明的優(yōu)點是：

本發(fā)明所述的枯草芽孢桿菌NYJ-02發(fā)酵液可兼防煙草野火病和煙草角斑病兩種病害，具有良好的生物農(nóng)藥開發(fā)前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明菌株NYJ-02的電鏡照片，桿狀，周生鞭毛；

圖2為本發(fā)明菌株NYJ-02對煙草角斑病菌的室內(nèi)抑菌照片，圖中抑菌帶寬度為15.7mm；

圖3為本發(fā)明菌株NYJ-02對煙草野火病菌的室內(nèi)抑菌照片，圖中抑菌帶寬度為10.2mm。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但并不是限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為常規(guī)生化試劑供應(yīng)商購買得到。

實施例1?枯草芽孢桿菌NYJ-02獲得與鑒定