[發明專利]一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法

無效

• 申請號: 201110119381.1
• 申請日: 2011-05-10
• 公開（公告）號: CN102229670A
• 公開（公告）日: 2011-11-02
• 發明（設計）人: 劉寶巖;張翼;李法慶
• 申請（專利權）人: 蘇州瑞藍博中藥技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明屬于天然藥物提取技術領域，涉及一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。

背景技術：

免疫球蛋白(Immunoglobulin，簡稱Ig)是指具有抗體活性，能與相應的抗原發生特異性結合反應的球蛋白，普遍存在于哺乳動物的血液、組織液、淋巴液及外分泌液中。免疫球蛋白在動物體內具有重要的免疫和生理調節作用，是動物體內免疫系統最為關鍵的組成物質之一。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。人體血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占總的免疫球蛋白的70-75％，分子量約15萬，含糖2～3％。盡管免疫球蛋白千變萬化，但都有類似的結構?？贵w分子是由兩對長短不同的多肽鏈所組成，四條鏈通過鏈間二硫鍵構成Y型基本結構(H2L2)。人體血清免疫球蛋白IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，它僅以單體形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG，它在抗感染中起到主力軍作用，它能夠促進單核巨噬細胞的吞噬作用(調理作用)，中和細菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原結合使病毒失去感染宿主細胞的能力(中和病毒)。免疫球蛋白一般用牛乳和豬血提取。近年來，免疫球蛋白廣泛應用于開發新型功能性食品添加劑，仔畜飼料以及生物新藥和醫藥生化診斷中，已成為研究和商業等部門重要的物質，前景十分廣闊。然而，免疫球蛋白對熱的不穩定性使得其產品開發受到很大的限制。

牦牛是我國特有的高原牛種，被稱為“高原之舟”，受到高原惡劣但無污染環境的選拔，擁有很強的免疫力。又因為受到高原強紫外線的照射，因此牦牛是天然的無菌資源寶庫。牦牛宰殺取肉后其血液往往沒有得到利用，全部當做污水排放，不但使牦牛的價值無法充分利用，而且增加了環境負擔。

從血液中提取免疫球蛋白，常用的方法有鹽析法(如多聚磷酸鈉絮凝法，硫酸氨鹽析法)、有機溶劑沉淀法(如冷乙醇分離法、辛酸沉淀法)、有機聚合物沉淀法、變性沉淀法、纖維素層析法、凝膠層析法、超濾法等，許多學者對提取免疫球蛋白作過一些深入的研究，但對抗體純化的綜合方法比較的較多，而限制純化純度和得率的瓶頸階段——粗提階段則研究較少。

發明內容

本發明的目的就是針對上述存在的不足，提供一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。

本發明說提供的技術方案是：

1)離心分離：在新鮮的牦牛血中加入抗凝劑，離心，保留血漿；

2)超濾：將血漿用水稀釋后通過超濾膜濃縮，洗滌除雜，得截留相；

3)超聲提?。簩⒔亓粝嗉尤氲揭掖贾谐曁崛≈貜?次，合并提取液；

4)沉淀：將提取液調酸，離心得沉淀；

5)冷凍干燥：將沉淀冷凍干燥即得。

所述步驟1)中的抗凝劑為檸檬酸鈉，用量為0.3％(V/V)。

所述步驟2)中的超濾膜為截留分子量3000～10000D的多孔纖維超濾膜。

所述步驟3)中的提取溶劑用量為10-15倍量(V/W)，提取時間為20-30min，室溫操作。

所述步驟4)中的酸為鹽酸或硫酸之一，酸化后的pH為7.3-7.7。

綜上所述，本發明存在以下優點：

1)用牦牛血為原料，變廢為寶，解決了牦牛宰殺后留下的問題；

2)溶劑簡單易得，毒性小，因此后處理簡單，成本低，而產品安全性更高；

3)膜分離只需要推動力，不需要蒸發耗熱，因此能耗小，低碳化；

4)超聲提取速度比一般的溶劑提取效率高，提取溫度低，不會使產品因受熱分解而損失，也不會引入其他污染物；

5)免疫球蛋白的析出pH離中性近，因此酸用量不大；

6)各步驟處理量大，速度快，適合大規模生產。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

在100L新鮮的牦牛血中加0.3％檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000～10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用10倍量(V/W)乙醇超聲提取20min，重復2次，合并提取液，加入鹽酸調解pH為7.3-7.7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為78.7％。

實施例2