[發明專利]一組新型的HRP5類似物及其制備方法

有效

• 申請號: 201110116643.9
• 申請日: 2011-05-06
• 公開（公告）號: CN102766197A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 馮軍;路建光;張喜全;徐宏江;吳勇;朱裕輝;楊潔
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;江蘇正大天晴藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K7/64;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/107;A61K38/10;A61K38/12;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體而言涉及一組新型的具有廣譜抗菌活性的HRP5類似物及其制備方法。

背景技術

自從青霉素發現以來，抗生素一直是人類治療病原微生物感染的有力武器，但隨著傳統抗生素的濫用，越來越多的病原菌開始對傳統抗生素產生耐藥性，所以急需尋找-類全新的抗菌藥物來替代抗生素進行使用。

陽離子抗菌肽(cationic?antimicrobial?peptides)是植物和動物產生的一般由12-50個氨基酸殘基組成的陽離子型(富含精氨酸及賴氨酸)多肽，能夠保護宿主不受外界病原微生物感染。陽離子抗菌肽的抗菌譜比傳統抗生素寬，來自昆蟲、豬、蛙以及人的陽離子抗菌肽不僅對革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌有抗菌作用，而且還具有抗真菌及抗病毒活性。傳統抗生素通過消除微生物生長或生存必不可少的條件，如使酶變性，來達到殺菌的目的，但細菌只要一種基因突變后就可以抵抗此類抗生素的攻擊。而陽離子抗菌肽則通過中和電荷的方法與細菌細胞膜相互作用，以此穿透殺死細菌，極大地減少了細菌產生耐藥性的可能。但天然的陽離子抗菌肽并非完美無缺，部分抗菌肽對真核生物有一定的毒性，對病原物高殺滅活性的同時往往伴隨著對真核生物的溶血作用。因此如何提高其活性并最大程度降低其毒性是目前抗菌肽藥物開發的難點和希望所在。目前的研究主要將α-螺旋的兩性抗菌肽作為研究對象，圍繞陽離子氨基酸以及疏水性氨基酸數量及位置，對抗菌肽進行結構改造，如殘基替換、截取天然抗菌肽的部分序列以及增加肽鏈的正電荷含量等，取得了較大進展。

富組蛋白(histidine?rich?protein，HRPs或histatins)是-類存在于靈長類動物腮腺和頜下腺分泌物中富含組氨酸的陽離子多肽。現已分離出至少12種人HRPs(HRP1-12)，其中HRP1、HRP3及HRP5是主要富組蛋白，占總HRPs的85％-90％，分別由38，32，24個氨基酸組成。HRP1和HRP3由不同的基因編碼，HRP5是HRP3經蛋白酶水解的產物，包含在HRP3的N末端24個殘基中。編碼HRP1，3的基因已被測序且定位于人類第4號染色體q13上。現有研究表明：HRPs具有多種活躍的生物學功能，其抗微生物作用尤為重要，如抑制、殺滅變形鏈球菌和白色念珠菌等。

HRP5含有24個氨基酸殘基，分子量為3037D。其氨基酸序列為Asp-Ser-His-Ala-Lys-Arg-His-His-Gly-Tyr-Lys-Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr(SEQ?ID?NO：1)。Raj等學者認為HRP5抗白色念珠菌的特性與其氨基酸序列有關，他們分別將HRP5及其殘基片段N16(1-16位氨基酸)、C16(9-24位氨基酸)、C14(11-24位氨基酸)、C12(13-24位氨基酸)、C10(15-24位氨基酸)和M10(7-16位氨基酸)分別與不同濃度的白色念球菌作用，檢測其抗白色念球菌的能力。試驗結果表明C16和C14有較強的抑制白色念珠菌生長的能力，而且HRP5與C16的抗白色念球菌的活性基本一致，而同樣含有16個氨基酸的N16抗白色念珠菌的活性遠遠低于C16。這一結果提示HRP5的抗白色念珠菌的功能區位于羧基端。為了進一步研究HRP5的結構和功能的關系，許多學者通過殘基替換得到了一系列的變異體，其中較重要的是dhvar1、dhvar2、dhvar4、dhvar5。它們是HRP5活性區(11-24位氨基酸)變異體。

發明內容

多肽或其藥用鹽，所述多肽具有如下氨基酸序列：

Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Leu-Xaa11-Lys-Tyr-Leu-Arg-Xaa16-Xaa17-Xaa18(SEQ?ID?NO：2)

其中Xaa1為Cys或缺失；

Xaa2為Lys、D-Lys、Arg、D-Arg、HoR或缺失；

Xaa3為Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe、Thi或缺失；

Xaa4為Lys、D-Lys、Arg、D-Arg、Aib或HoR；

Xaa5為Lys、D-Lys、Arg、D-Arg或HoR；

Xaa6為Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe或Thi；

Xaa7為Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe或Thi；