[發明專利]通過組織培養獲得黃花苜蓿再生植株的方法及其培養基

無效

• 申請號: 201110115412.6
• 申請日: 2011-05-05
• 公開（公告）號: CN102138533A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 王濤;董江麗;仝宗永;靳永勝
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種獲得黃花苜蓿愈傷組織的培養基，由下述質量份的營養成分組成：

大量元素以硝酸鉀計2830份、微量元素以硫酸錳計1份、鐵鹽以乙二胺四乙酸鈉計6.97份、有機成分以尼克酸計10份、肌醇100份、2，4-二氯苯氧乙酸1份-2份或1份或2份、N6-呋喃甲基腺嘌呤1份-2份或1份或2份；

所述大量元素由下述質量份的物質組成：

硝酸鉀2830份、硫酸銨463份、磷酸二氫鉀400份、七水硫酸鎂185份和二水氯化鈣166份；

所述微量元素由下述質量份的物質組成：

硫酸錳1份、硼酸0.5份、七水硫酸鋅0.1份、碘化鉀0.1份、二水鉬酸鈉0.01份、五水硫酸銅0.02份和六水氯化鈷0.01份；

所述鐵鹽由下述質量份的物質組成：

乙二胺四乙酸鈉6.97份；

所述有機成分由下述質量份的物質組成：

尼克酸10份、鹽酸硫胺素10份和鹽酸吡哆醇10份。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：

所述培養基由以下成分組成：

硝酸鉀、硫酸銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、硫酸錳、硼酸、七水硫酸鋅、碘化鉀、二水鉬酸鈉、五水硫酸銅、六水氯化鈷、乙二胺四乙酸鈉、尼克酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、肌醇、2，4-二氯苯氧乙酸和N6-呋喃甲基腺嘌呤和水；

以上成分在所述培養基中濃度分別為：

硝酸鉀2.830g/L、硫酸銨0.463g/L、磷酸二氫鉀0.400g/L、七水硫酸鎂0.185g/L、二水氯化鈣0.166g/L、硫酸錳1mg/L、硼酸0.5mg/L、七水硫酸鋅0.1mg/L、碘化鉀0.1mg/L、二水鉬酸鈉0.01mg/L、五水硫酸銅0.02mg/L、六水氯化鈷0.01mg/L、乙二胺四乙酸鈉6.97mg/L、尼克酸10mg/L、鹽酸硫胺素10mg/L、鹽酸吡哆醇10mg/L、肌醇100mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1mg/L-2mg/L和N6-呋喃甲基腺嘌呤1mg/L-2mg/L。

3.一種獲得黃花苜蓿愈傷組織的固體培養基，由凝固劑和權利要求1或2所述的培養基配成固體培養基。

4.根據權利要求3所述的固體培養基，其特征在于：

所述凝固劑在所述固體培養基中的濃度為8g/L；

所述凝固劑為瓊脂。

5.根據權利要求3或4所述的固體培養基，其特征在于：所述固體培養基為如下1)或2)所示：

1)所述固體培養基中2，4-二氯苯氧乙酸的濃度為2mg/L和N6-呋喃甲基腺嘌呤的濃度為1mg/L；

2)所述固體培養基中2，4-二氯苯氧乙酸的濃度為1mg/L和N6-呋喃甲基腺嘌呤的濃度為2mg/L。

6.根據權利要求1-5中任一所述的培養基，其特征在于：

所述培養基的pH值為5.8；

所述黃花苜蓿為四倍體黃花苜蓿或二倍體黃花苜蓿。

7.一種獲得黃花苜蓿愈傷組織的方法，包括如下步驟：用權利要求5中1)所示的培養基誘導培養黃花苜蓿外植體，得到黃花苜蓿愈傷組織。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：

所述方法還包括用權利要求5中2)所示的培養基增殖培養黃花苜蓿愈傷組織的步驟；

所述黃花苜蓿外植體為切成塊的幼嫩葉片；

所述黃花苜蓿為四倍體黃花苜蓿或二倍體黃花苜蓿。

9.一種獲得黃花苜蓿再生植株的方法，包括以下步驟：將權利要求7或8中所述的方法得到的黃花苜蓿愈傷組織接種到分化培養基上進行分化培養得到芽，即得到黃花苜蓿再生植株。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：

所述分化培養基由以下成分組成：

硝酸鉀、硫酸銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、硫酸錳、硼酸、七水硫酸鋅、碘化鉀、二水鉬酸鈉、五水硫酸銅、六水氯化鈷、乙二胺四乙酸鈉、尼克酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、肌醇、N6-呋喃甲基腺嘌呤和水；

以上成分在所述分化培養基中濃度分別為：

硝酸鉀2.830g/L、硫酸銨0.463g/L、磷酸二氫鉀0.400g/L、七水硫酸鎂0.185g/L、二水氯化鈣0.166g/L、硫酸錳1mg/L、硼酸0.5mg/L、七水硫酸鋅0.1mg/L、碘化鉀0.1mg/L、二水鉬酸鈉0.01mg/L、五水硫酸銅0.02mg/L、六水氯化鈷0.01mg/L、乙二胺四乙酸鈉6.97mg/L、尼克酸10mg/L、鹽酸硫胺素10mg/L、鹽酸吡哆醇10mg/L、肌醇100mg/L和N6-呋喃甲基腺嘌呤0.4mg/L；

所述分化培養基的pH值為5.8；

所述方法在所述分化培養之后，還包括將得到的芽接種到生根培養基上進行培養的步驟；

所述生根培養基由以下成分組成：

硝酸鉀、硫酸銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、硫酸錳、硼酸、七水硫酸鋅、碘化鉀、二水鉬酸鈉、五水硫酸銅、六水氯化鈷、乙二胺四乙酸鈉、尼克酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和水；

以上成分在所述生根培養基中濃度分別為：

硝酸鉀1.415g/L、硫酸銨0.2315g/L、磷酸二氫鉀0.200g/L、七水硫酸鎂0.0925g/L、二水氯化鈣0.083g/L、硫酸錳1mg/L、硼酸0.5mg/L、七水硫酸鋅0.1mg/L、碘化鉀0.1mg/L、二水鉬酸鈉0.01mg/L、五水硫酸銅0.02mg/L、六水氯化鈷0.01mg/L、乙二胺四乙酸鈉6.97mg/L、尼克酸10mg/L、鹽酸硫胺素10mg/L、鹽酸吡哆醇10mg/L；

所述生根培養基的pH值為5.8；

所述黃花苜蓿外植體為切成塊的幼嫩葉片；

所述黃花苜蓿為四倍體黃花苜蓿或二倍體黃花苜蓿。