[發明專利]一種毛細管電泳緩沖液及其制備方法

有效

• 申請號: 201110115348.1
• 申請日: 2011-05-05
• 公開（公告）號: CN102274690A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 趙興春;葉健;姜伯瑋
• 申請（專利權）人: 公安部物證鑒定中心
• 主分類號: B01D57/02
• 分類號: B01D57/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種毛細管電泳緩沖液及其制備方法。

背景技術

毛細管電泳作為一種重要分子生物學技術，已被廣泛的用于不同生物分子(DNA、RNA、蛋白質等)的分離。

DNA測序及DNA片段分析等都基于電泳這種技術。在堿基測序過程中，需將DNA產物變性形成DNA樣本的單鏈結構，繼而通過毛細管電泳使不同片段長度的單鏈DNA分子分離以實現DNA序列的測定及特定DNA片段分離及檢測。

在STR遺傳標記分析過程中，同樣需將DNA特定位點的熒光標記產物變性成DNA樣本的單鏈結構，繼而通過毛細管電泳將不同長度且不同熒光的DNA片段分離，通過后續軟件分析以實現遺傳鑒定。

目前，在DNA片段分離及檢測最常見的檢測設備主要是美國ABI公司的310、3100、3100-Avant、3130和3130xl型遺傳分析儀等。上述儀器均屬于毛細管電泳儀，該類儀器在電泳時其正負電極需要放置電泳緩沖液。緩沖液的緩沖能力及維持電流穩定的能力決定著全部電泳過程的穩定性及電泳結果的可靠性與重復性。

緩沖溶液就是具有緩沖能力的溶液，提供穩定的pH值，使電滲流穩定，如果樣品帶電，那么樣品所帶電荷也是穩定的，從而使得結果可重復性增強。

發明內容

本發明的目的在于提供一種毛細管電泳緩沖液。

本發明提供的電泳緩沖液，pH為7.5-8.5，溶劑是水，溶質包括一種陰離子和金屬螯合劑；所述陰離子與所述金屬螯合劑的配比為(12.164-48.656)g∶(0.8-1.2)mmol；所述陰離子為N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸和/或N-三(羥甲基)甲氨基-2-氨基丙磺酸。

上述陰離子、所述金屬螯合劑與水的配比為(20-30)g∶(0.8-1.2)mmol∶(90-110)ml，優選為(24.328-25.93)g∶1mmol∶100ml。

上述溶質是所述陰離子和金屬螯合劑；所述金屬螯合劑優選為EDTA。

上述溶質還包括一種陽離子；所述陽離子為雙(三羥甲基)氨基甲烷；所述陽離子與所述陰離子的摩爾比為1∶1。

上述溶質是所述陰離子、所述陽離子和金屬螯合劑；所述金屬螯合劑優選為EDTA。

本發明的另一目的在于提供一種溶膠緩沖液。

本發明提供的溶膠緩沖液是用上述電泳緩沖液制備得到的。

上述溶膠緩沖液是將上述電泳緩沖液與尿素、2-吡咯烷酮混合制備得到；所述電泳緩沖液與尿素、2-吡咯烷酮的配比是：(8-12)ml∶(45-52)g∶(3-8)ml；優選配比是：10ml∶48g∶5ml。

本發明的又一目的在于提供一種電泳溶膠。

本發明的電泳溶膠是用有機聚合物與上述溶膠緩沖液混合制備得到。

上述有機聚合物與上述溶膠緩沖液的配比是(2-5)g∶100ml，優選是4g∶100ml；所述電泳溶膠的pH為7.5-8.5；所述有機聚合物優選為聚N，N-二甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺和/或聚N，N-二甲基丙烯酰胺。

上述電泳緩沖液、上述溶膠緩沖液或上述電泳溶膠在毛細管電泳中的應用均屬于本發明的保護范圍。

實驗證明，實施例2，3中緩沖液在被用作毛細管電泳緩沖液之初時，在實驗結果上與實施例1緩沖液無顯著性差異，基本能夠獲得理想的分型圖譜(均如圖1所示)，且無優劣之分。但添加了雙(三羥甲基)氨基甲烷的實施例1的緩沖液在電泳次數達到一定程度時候，會比實施例2，3中單純由TAPS與EDTA組成的電泳緩沖液表現的更加穩定，能夠具有較多的使用次數(圖2-圖7)。

將本發明的電泳緩沖液換成TAE緩沖液、TBE緩沖液或TPE緩沖液進行毛細管電泳得不到標準DNA樣品9947A的正確DNA分型(圖8-圖10)，而實施例1中電泳緩沖液能得到標準DNA樣品9947A的正確DNA分型(圖11)，進一步說明本發明的緩沖液的效果好，即降低電滲作用、穩定性、重復性都優于其他緩沖液。

附圖說明

圖1為利用實施例1緩沖液的Typer^TM500分子量內標的STR分型圖譜。

圖2為用實施例2的電泳緩沖液進行電泳，陽極pH值實時監測結果。

圖3為用實施例2的電泳緩沖液進行電泳，進行第48組樣本檢測時實時熒光監測結果。

圖4為用實施例3的電泳緩沖液進行電泳，陽極pH值實時監測結果。

圖5為用實施例3的電泳緩沖液進行電泳，進行第64組樣本檢測時實時熒光監測結果。

圖6為用實施例1的電泳緩沖液進行電泳，陽極pH值實時監測結果。