[發明專利]茶葉中含氰擬除蟲菊酯農藥殘留的快速定量檢測方法

無效

• 申請號: 201110109145.1
• 申請日: 2011-04-28
• 公開（公告）號: CN102262089A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 張群峰;徐勝臻;陳玉瓊;余志;倪德江
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N1/28
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平

技術領域

本發明涉及一種檢測茶葉中農藥殘留的方法，具體地說，是對茶葉中含氰擬除蟲菊酯農藥殘留的快速定量測定的方法。

背景技術

茶葉中農藥殘留不僅通過泡飲直接對人體產生傷害，其潛在威脅和富集作用更使之成為一個嚴重社會問題。當前茶葉生產主要使用而且在茶葉中殘留現象最為嚴重的是擬除蟲菊酯類農藥，大部分為含氰擬除蟲菊酯。但由于沒有針對該類農藥簡便準確的檢測技術，使其很難在茶葉生產和貿易中得到實時監測和控制。

茶葉成分復雜，含有大量色素和其他干擾物質，現有的測定食品中農藥殘留量的方法不能直接用于茶葉農藥殘留的檢測。當前農藥殘留分析方法表現為：精確可靠的檢測方法其處理步驟繁瑣，實驗條件要求高，如氣相色譜，氣質聯用等方法；簡易快速的方法靈敏度低，主要用于定性分析，測定結果可靠性差，如薄層層析法等。

農藥殘留常用分析方法為儀器檢測，其樣品前處理過程費時、費力，對操作人員的熟練程度及工作經驗要求較高，所需分析儀器昂貴，分析人員專業技能要求高；酶法檢測僅對有機磷農藥殘留敏感，不作用于擬除蟲菊酯類農藥；免疫檢測技術復雜，成本較高，現有技術有限，研究進展緩慢。

中國專利申請CN101865902A，公開了“一種含氰基擬除蟲菊酯類農藥多殘留的快速檢測方法”，該方法僅用于定性反應，且將浸提和反應置于同一分液漏斗中，使得茶葉中的干擾成分不能被排除，經試驗驗證，茶葉中的特征成分能夠使反應呈現假陽性，因而不能用于茶葉中擬除蟲菊酯農藥殘留的檢測。中國專利CN1763509“擬除蟲菊酯農藥殘留的快速檢測”也由于相同原因不能用于茶葉農殘檢測。另外上述兩方法均有產氣反應不充分，氣體轉移效率低的缺點，使得定量檢測回收率低。

在非專利文獻中，王丹紅所采用方法基于中國專利申請CN101865902A，并用到氮氣吹掃轉移反應裝置中產生的HCN氣體，最后用鄰二硝基苯顯色的方法檢測，雖部分解決了轉移效率問題，但仍存在假陽性現象，也不能控制反應中農藥充分水解。

中國專利申請CN101334408公開了“一種含氰基擬除蟲菊酯農藥多殘留分析的酶聯免疫吸附檢測方法，屬于免疫分析技術領域，含人工合成半抗原間苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯與卵清蛋白偶聯復合物做包被抗原，技術復雜，成本較高。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速檢測茶葉中含氰擬除蟲菊酯農藥殘留的方法，以解決現有技術存在的弊端，克服了常用儀器分析方法耗時長，技術要求高，成本高的缺點；并能排除茶葉中干擾物質，靈敏度高、成本低、簡便易推廣。

實現本發明的技術方案是：對茶葉中含氰擬除蟲菊酯農藥殘留用石油醚萃取，將萃取液在反應體系中經排氣和水解，產生氰離子后加入硫酸產生HCN氣體，并通過加熱攪拌和抽空氣將HCN充分轉移吸收并檢測，其方法步驟：

1)浸提萃取：稱取3g磨碎干茶樣于三角瓶，加入試劑20mL沸程為60-90℃石油醚，超聲波浸提15min；

2)排氣水解反應：將浸提液過濾到產氣反應裝置，加入試劑10mL?6mol/L氫氧化鈉，連好裝置(見附圖)，關閉收集閥，打開排氣閥，打開泵，65℃水浴攪拌，抽氣反應6min；

3)產氣收集：打開收集閥，關閉排揶閥，通過加液漏斗加入試劑20mL?20％硫酸，抽氣收集10min；

4)檢測：取收集瓶加入試劑5mLpH為6.8的緩沖溶液和試劑0.2mL?1％氯胺T，放置3min后加入試劑5mL異煙酸-吡唑啉酮溶液，反應30min在638nm處比色。

本發明所述的緩沖液，按34g無水磷酸二氫鉀，89.5g十二水磷酸氫二鈉溶于1L蒸餾水中；

本發明所述的異煙酸-吡唑啉酮溶液，按1.5g異煙酸溶于100mL?0.5％氫氧化鈉溶液，0.25g吡唑啉酮溶于20mL?N，N二甲基甲酰胺，按5∶1混合。

本反應產氣裝置組裝由實驗室常規玻璃儀器和抽氣泵等簡單設備組成，排除提取液的過程即常規檢測中的濃縮過程，該過程與堿解反應同時進行，并通過抽空氣加快氣體排出。

本發明的優點在于：

1適用于茶葉：通過石油醚萃取，將浸提和反應過程分開，排除茶葉中干擾物質，提高檢測準確性，在茶葉擬除蟲菊酯檢測中有較好的穩定性；

2方法快速：反應將常規檢測中的濃縮，凈化和反應同時進行；

3靈敏度高：農藥反應徹底，且HCN氣體轉移效率高，對含氰擬除蟲菊酯的檢出限可達0.25mg/kg；

4簡便易于推廣：設備簡單，成本低，技術要求不如儀器分析嚴格；