[發(fā)明專利]一種抑制caspase-3基因表達的siRNA

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110107036.6
• 申請日: 2011-04-27
• 公開（公告）號: CN102220324A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設計）人: 張勤麗;牛僑;教霞;李娜;吉俊偉
• 申請（專利權）人: 山西醫(yī)科大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P25/28
• 代理公司: 太原華弈知識產(chǎn)權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

技術領域

本發(fā)明涉及一種siRNA，特別是一種抑制caspase-3基因表達的siRNA。

背景技術

RNA干擾(RNA?interference，RNAi)現(xiàn)象是一種在進化上保守的抵御轉基因或外來病毒侵犯的防御機制，是一種序列特異性的轉錄后基因沉默(post-transcriptional?gene?silencing，PTGS)。它已在許多不同種屬的生物體中被發(fā)現(xiàn)，并在生物體細胞之間進行傳遞，具有抵抗病毒入侵和維持基因組穩(wěn)定的作用。RNAi技術不僅能大大推進人類后基因組計劃的發(fā)展，還能高通量地篩選藥物靶基因，促進基因治療、新藥開發(fā)等，為治療癌癥、遺傳病等疾病開辟新的途徑。RNAi的研究與應用具有極其重要的理論和實際意義，將對醫(yī)學生物學的發(fā)展產(chǎn)生深遠的影響。

雖然RNA干擾技術的研究歷程較短，但其發(fā)展速度卻超乎人們的想象。在過去的幾年時間里，RNAi作為一種新基因療法，被廣泛的應用于病毒感染、癌癥、顯性遺傳病等醫(yī)學研究中，開辟了“基因治療(gene-specific?therapeutics)”的新理念，小干擾RNA(small?interfering?RNA，siRNA)甚至被稱為“治病藥物”。目前，人們已經(jīng)開始利用RNAi技術從基因組水平分析哺乳動物體內(nèi)基因的功能，可以更迅速地鑒定出許多與疾病相關的基因，使我們可以更好地研究生物體內(nèi)基因調(diào)控的網(wǎng)絡系統(tǒng)。現(xiàn)在RNAi技術已經(jīng)能夠成功治愈哺乳動物細胞、器官及活體的病變，預示著不久的將來，RNAi會成功用于人類疾病的治療，使得siRNA的“治病藥物”稱號名副其實。

公知人體內(nèi)的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關細胞死亡過程的研究，近年來已成為生物學、醫(yī)學研究的一個熱點。到目前為此，人們已經(jīng)知道細胞的死亡起碼有兩種方式，即細胞壞死與細胞凋亡。目前的研究認為，細胞壞死是細胞接受刺激后的一種被動的細胞死亡方式，而細胞凋亡則是一種主動的程序性的細胞死亡方式，它是細胞的一種基本生物學現(xiàn)象。細胞凋亡是多基因嚴格控制的過程，這些基因在種屬之間非常保守，如Bcl-2基因家族、caspase基因家族、癌基因等。隨著分子生物學技術的發(fā)展，對多種細胞凋亡的過程有了相當?shù)恼J識，但是迄今為止凋亡過程確切機制尚不完全清楚，而凋亡過程的紊亂可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關系，如神經(jīng)退行性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等。如果能應用RNA干擾技術特異性地阻抑凋亡相關基因的表達及其蛋白質(zhì)水平，將可以有效沉默凋亡相關基因，幫助細胞減少凋亡，增進細胞活力。因此，對凋亡相關基因的RNA干擾研究與應用具有極其重要的理論和實際意義，能有效地篩選藥物靶基因，促進基因治療、新藥開發(fā)等，為治療神經(jīng)退行性疾病等與細胞凋亡相關的疾病開辟新的途徑。

使用RNAi治療疾病的思路是根據(jù)病原體的致病基因序列以及生物體內(nèi)與疾病發(fā)生相關的基因序列，設計和制備與這些基因序列具有同源性的小干擾RNA（siRNA），然后通過某種方式將siRNA轉移到動物體內(nèi)使有關疾病基因發(fā)生沉默，從而達到治療的目的。其優(yōu)勢在于只抑制疾病相關蛋白的表達，而不損傷正常細胞功能，其序列特異性及基因抑制作用的強大性是其他藥物難以匹敵的。siRNA可用于治療任何由于基因發(fā)生突變或過度表達所引起的疾病，只要確定了與疾病相關的靶點，即靶基因，就可以通過siRNA特異性地使靶基因保持沉默。所以，尋找最適宜的siRNA，對于RNA干擾的廣泛應用至關重要。

caspase基因家族是一類基因結構相似并參與細胞凋亡的基因。根據(jù)它們對細胞凋亡結果的不同分為兩類，一類是抑制細胞凋亡的基因，另一類是促進細胞凋亡基因。caspase-3基因是其中促進細胞凋亡的基因，其過度表達能夠加速與該凋亡基因相關的疾病的細胞凋亡，因此對caspase-3?RNAi的研究與應用具有極其重要的理論和實際意義。但是作用于caspase-3基因，即靶基因不同位點的siRNA的作用效果差異很大，可能與siRNA的堿基分布、兩端自由能大小等有關。因此，在siRNA沉默特定基因的實驗中，有效的siRNA序列是該技術的關鍵點。然而到目前為止，還沒有最適宜的抑制caspase-3基因表達的siRNA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術中還沒有最適宜的抑制caspase-3基因表達的siRNA的問題，提供一種抑制caspase-3基因表達的siRNA。

為達到上述目的，本發(fā)明是采用如下技術方案實現(xiàn)的：一種抑制caspase-3基因表達的siRNA序列，該序列為：