[發(fā)明專利]一種檢測(cè)三種魚類彈狀病毒的測(cè)量審核用試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110106546.1
• 申請(qǐng)日: 2011-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102212620A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張利峰;劉來(lái)福;段向英;張偉;谷強(qiáng);劉國(guó)傳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)三種魚類彈狀病毒的測(cè)量審核用試劑盒。

背景資料

傳染性造血組織壞死病病毒（Infectious?hematopoietic?necrosis?virus,?IHNV），病毒性出血性敗血癥病毒（Viral?hemorrhagic?septicemia?virus,?VHSV）和鯉春病毒血癥病毒（Spring?Viraemia?of?Carp?Virus,?SVCV）是同屬?gòu)棤畈《究?Rhabdoviridae)的三種魚類病毒，也是影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的三種重要病毒。其中，IHNV和VHSV屬于粒外彈狀病毒屬（Novirhabdovirus），SVCV屬于水泡病毒屬（Vesiculovirus），它們均是單鏈負(fù)股RNA病毒。這三種病毒廣泛分布于歐洲、美洲和亞洲的許多地區(qū)，可感染多種魚類，尤其是對(duì)魚苗和幼魚，能引起較高的死亡率，嚴(yán)重時(shí)均可達(dá)到90%以上。分別由這三種病毒引起的傳染性造血器官壞死病（Infectious?hematopoietic?necrosis,?IHN），病毒性出血性敗血癥（Viral?hemorrhagic?septicemia,?VHS）和鯉春病毒血癥（Spring?Viraemia?of?Carp,?SVC）一旦爆發(fā)，將會(huì)給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)災(zāi)難性的損失，所以它們是世界各國(guó)積極進(jìn)行防制的三種魚類疫病。

目前，國(guó)內(nèi)有許多沿海實(shí)驗(yàn)室和內(nèi)陸水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)達(dá)的地區(qū)試驗(yàn)室都開(kāi)展關(guān)于這三種病毒的檢測(cè)。常用的病毒檢測(cè)方法是細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒法、血清學(xué)方法以及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒法結(jié)果可靠，但檢測(cè)周期長(zhǎng)，不適用于快速鑒別診斷，而且往往還需要其他方法進(jìn)行后繼檢測(cè)，才能確定病毒種類。普通RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)的應(yīng)用，提高了檢測(cè)的特異性和靈敏度，縮短了檢測(cè)時(shí)間，取得了一定的效果。Williams等（1999年）還報(bào)到了使用多重RT-PCR檢測(cè)IPNV、IHNV和VHSV的研究，大大提高了多種病毒檢測(cè)時(shí)的工作效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種檢測(cè)三種魚類彈狀病毒的測(cè)量審核用試劑盒。該試劑盒主要在動(dòng)物檢疫專業(yè)的測(cè)量審核領(lǐng)域使用，用于比對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)三種魚類彈狀病毒能力的試劑盒，即該試劑盒能用于評(píng)價(jià)考核實(shí)驗(yàn)室是否能正確檢測(cè)三種魚類彈狀病毒。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種檢測(cè)三種魚類彈狀病毒的測(cè)量審核用試劑盒，保存于-20℃，該試劑盒是由以下樣品組成：

A：含10⁷拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列；

B：含10⁸拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列；

C：含10⁷拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為傳染性造血組織壞死病病毒（IHNV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列；

D：含10⁸拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為傳染性造血組織壞死病病毒（IHNV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列；

E：含10⁷拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為鯉春病毒血癥病毒（SVCV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列；

F：含10⁸拷貝/mL目的核酸片段的溶液，所述目的核酸片段為鯉春病毒血癥病毒（SVCV）體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段，其對(duì)應(yīng)的DNA序列為序列表SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列；

G：不含目的核酸片段的溶液。

其中，所述溶液優(yōu)選為75％乙醇溶液。

本發(fā)明所述測(cè)量審核用試劑盒的使用方法：

1.各個(gè)參試實(shí)驗(yàn)室可選擇國(guó)際、國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法或其他非標(biāo)方法，進(jìn)行三種魚類彈狀病毒核酸的檢測(cè)驗(yàn)證；

2.試劑盒說(shuō)明書

2.1?保存溫度：-20℃；

2.2?有效期：6個(gè)月；

2.3?使用方法：使用前顛倒混勻管內(nèi)液體，然后再抽提RNA核酸進(jìn)行測(cè)試分析；

2.4?循環(huán)條件設(shè)置：