[發(fā)明專利]乙型腦炎病毒NS1蛋白特異性B細胞抗原表位多肽及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110105067.8
• 申請日: 2011-04-26
• 公開（公告）號: CN102206249A
• 公開（公告）日: 2011-10-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 華榮虹;步志高
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/40;G01N33/569
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗原表位多肽，尤其涉及乙型腦炎病毒JEV?NS1蛋白特異性B細胞抗原表位多肽，本發(fā)明還涉及該抗原表位多肽在診斷乙型腦炎病毒中的應(yīng)用，屬于分子免疫學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

流行性乙型腦炎是由乙型腦炎病毒(Japanese?Encephalitis?virus，JEV)引起的一種重要蚊媒性人獸共患傳染病。該病毒首先于1953年在日本從患者腦組織中分離獲得，因此稱日本腦炎病毒，所致疾病在日本稱日本乙型腦炎。在我國最早于1940年分離此病毒，為了與甲型腦炎相區(qū)別，定名為流行性乙型腦炎，簡稱乙腦。在世界范圍內(nèi)每年有30,000-50,000例乙腦病例，約25％-30％死亡，50％導(dǎo)致永久性中樞神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。我國近年每年的乙腦病例大于5000例，死亡200例以上。對于流行性乙型腦炎病毒多種動物易感，但除人、馬和豬外通常不呈現(xiàn)臨床癥狀。對人主要引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性感染，人感染臨床上以高熱、意識障礙、抽搐、呼吸衰竭及腦膜刺激征為特征。母豬感染可引起流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或木乃伊胎，公豬感染導(dǎo)致睪丸腫大影響繁殖性能為特征，少數(shù)豬只感染可能呈現(xiàn)發(fā)熱和神經(jīng)癥狀，而其他豬則大多數(shù)不呈顯癥狀。給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。馬屬動物易感染，少數(shù)引起腦炎與神經(jīng)癥狀，馬是終末宿主。蚊是JEV的主要傳播媒介，豬是該病毒在自然界中最重要的貯存與增殖宿主。乙型腦炎病毒主要在亞洲流行，而最近發(fā)現(xiàn)在南半球也有報道，這說明流行性乙型腦炎可能在世界范圍內(nèi)威脅著人類健康。

乙型腦炎病毒JEV屬黃病毒科，黃病毒屬，為單鏈正鏈RNA病毒。基因組約11kb，包含一個大的開放閱讀框架(ORF)，兩端是5’端和3’端非編碼區(qū)(UTR)。基因組5’端有帽子結(jié)構(gòu)，但在3’端沒有poly(A)尾。ORF編碼含3432個氨基酸的前體蛋白，在病毒和宿主細胞蛋白酶的作用下加工為10個成熟蛋白，包含3個結(jié)構(gòu)蛋白(C，prM，E)，7個非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5)。病毒粒子呈球形，直徑約30nm，有囊膜。JEV只有一個血清型，在抗原性上與西羅病毒、墨羅河谷腦炎病毒、圣路易腦炎病毒等屬同一血清群，存在抗原交叉反應(yīng)。病毒囊膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鵝、鴿、雛雞等動物紅細胞。病毒對熱抵抗力弱，56℃30分鐘或100℃2分鐘即可滅活，但對低溫和干燥的抵抗力很強。乙醚、1∶1000的去氧膽酸鈉以及常用消毒劑均可滅活病毒，在酸性條件下不穩(wěn)定，適宜pH8.5～9.0。

采用疫苗進行預(yù)防接種是控制該病流行的有效措施。對人或動物機體的JEV抗體檢測是了解JEV感染或免疫情況的重要內(nèi)容，也是指導(dǎo)免疫預(yù)防的重要科學(xué)依據(jù)。NS1蛋白是乙腦病毒的一種重要的非結(jié)構(gòu)蛋白，不存在于病毒粒子結(jié)構(gòu)中，只有在自然感染或弱毒疫苗免疫情況下機體才產(chǎn)生抗NS1蛋白抗體，而滅活疫苗免疫或亞單位疫苗免疫則不產(chǎn)生NS1蛋白抗體。所以檢測NS1蛋白抗體可以診斷JEV感染，以及鑒別診斷滅活苗免疫與感染。JEV?E蛋白極易與其它黃病毒如登革病毒、西尼羅病毒等產(chǎn)生血清學(xué)交叉反應(yīng)而影響診斷結(jié)果。而JEV?NS1蛋白抗體特異性強，與特性相近的其它黃病毒如登革病毒、西尼羅病毒等血清學(xué)交叉反應(yīng)極低。以NS1蛋白為靶抗原檢測具有很強的特異性。更進一步地，采用NS1蛋白特異性抗原表位多肽為抗原檢測相應(yīng)抗體則可以進一步提高檢測的特異性，也可以更好地進行質(zhì)量標準控制。有利于提高試劑盒的質(zhì)量標準化與生產(chǎn)控制水平，也可以提高檢測診斷結(jié)果的特異性。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的之一提供乙型腦炎病毒JEV?NS1蛋白特異性B細胞抗原表位多肽。

本發(fā)明的目的之二是將所述的乙型腦炎病毒JEV?NS1蛋白特異性B細胞抗原表位多肽應(yīng)用于制備成診斷或檢測乙型腦炎病毒的試劑。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種乙型腦炎病毒JEV?NS1蛋白特異性B細胞抗原表位多肽，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1所示(₃₄₀H-HDETTLVRSQV-OH₃₅₀)。該抗原表位序列在不同JEV毒株中高度保守，只有少數(shù)毒株中該序列中第四位氨基酸T突變?yōu)锳。

通過試驗進一步發(fā)現(xiàn)，將SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列中第四位氨基酸殘基T替換為A后，所得到的氨基酸序列為SEQ?ID?NO：2所示(₃₄₀H-HDEATLVRSQV-OH₃₅₀)與SEQ?ID?NO：1具有同樣的與NS1蛋白單抗結(jié)合活性。