[發明專利]重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗、其構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201110101315.1
• 申請日: 2011-04-21
• 公開（公告）號: CN102145166A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 唐應華;宮玉珍;侯鳳香;陸吉虎;吳培培;王永偉;何家惠;侯繼波
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/12;C12N15/09;C12N15/70;C12N15/866;A61P31/14;A61P31/16
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 盧霞

技術領域

????本發明涉及一種重組疫苗，具體地說，涉及一種重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗，屬于生物工程技術領域。

背景技術

H5和H9亞型禽流感(AI)和雞傳染性法氏囊病（IBD）是嚴重危害養雞業發展的重要疫病。目前，我國對這3種疾病的防控主要依賴于疫苗免疫。

現有禽流感疫苗存在的問題?據OIE統計，從2005年底起，我國實施全面強制免疫以來，我國仍發生42起高致病性H5亞型禽流感。我國學者利用反向遺傳技術已經開發出5代H5亞型禽流感疫苗，即Re-1至Re-5，仍趕不上病毒的變易。特別注意的是，2008年江蘇東臺爆發的禽流感與現用疫苗株Re-4在基因水平上屬于同一分支。現有疫苗不能對不斷出現的新變易株提供有效保護。因此，亟需一種具有廣譜免疫效力的新疫苗。

H9亞型禽流感感染雞群后癥狀輕微，其本身并不一定造成禽群的大規模死亡，但易發生并發或繼發感染，引起蛋雞產蛋量顯著下降，飼料報酬降低等，造成嚴重經濟損失。隨著疫苗的使用，病毒在免疫選擇壓作用下，發生變異以逃逸免疫。類似于H5亞型禽流感，市場現有多種不同H9疫苗株，如F株、Sy株、SS/94株、HL株和SD696株等，仍不能對新出現的變易株提供有效保護。因此，開發具有廣譜免疫效力的新疫苗勢在必行。

雞傳染性法氏囊病的危害?雞傳染性法氏囊對我國養禽業造成了巨大的危害，尤其是自1991年強毒和超強毒以及變易株引起的發病，常使局部地區IBD的防控相當困難。防治該病現用疫苗有常規的滅活疫苗和活疫苗，以及初步應用的亞單位疫苗。

現有傳染性法氏囊疫苗存在的問題??現用活疫苗包括中等弱毒活疫苗和中等偏強毒疫苗。中等弱毒活疫苗用于無母源抗體的雛雞早期免疫，對有母源抗體的雞免疫效果較差，免疫時如果母源抗體的水平仍很高，則該類雞只不僅免疫效果差、而且會降低其體內循環抗體，導致免疫后數周發病。中等偏強毒疫苗時，能使低母源抗體水平雞只有較強的免疫反應，但其安全性較差，會致使免疫時低抗體水平雞只應激水平大甚至發病。另外由于現有生產疫苗的無特定病原（SPF）雞胚均存在一定程度的REV等外源性病毒污染。這對活疫苗應用帶來一定的風險。現用滅活疫苗的生產受雞胚供應的限制，且該制備過程需要人力較多，很多工藝煩瑣，且部分工藝節點難以實現標準化控制。

現有研究表明，流感病毒的M2e能促進機體產生良好的廣譜性免疫保護。M.D.?Filette?等用M2e與HBcAg融合表達，并與CTA1-DD佐劑聯合使用免疫小鼠，能保護H3N1或H1N1的攻毒。A.?Jegerlehner等研究表明，將M2e蛋白與HBcAg偶聯的免疫效果優于M2e與HBcAg嵌合表達形成病毒樣顆粒的免疫效果。G.?Zhao等用含多拷貝M2e抗原免疫小鼠后，能對不同H5N1分支病毒的攻擊提供有效保護。禽流感M2e與血藍蛋白(KLH)的偶聯物制備疫苗，不僅能對同一亞型內不同變易株的攻擊提供保護，還能對不同亞型禽流感病毒的攻擊提供保護，提高其存活率達80%。但KLH是一種異源蛋白，誘導產生大量與禽流感免疫無關的抗體。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種抵抗禽流感和雞傳染性法氏囊病毒的重組疫苗。

本發明的重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗中，包含帶有雞傳染性法氏囊病毒VP2基因的重組表達質粒，所說的VP2基因中融合有H5或H9亞型禽流感病毒的M2e基因，其中H5亞型禽流感病毒的M2e氨基酸序列為SLLTEVETPTRN，H9亞型禽流感病毒的?M2e氨基酸序列為SLLTEVETHTRN,VP2基因序列參考GenBank登錄號DQ906921。

所說的融合基因中，H5或H9亞型禽流感病毒的M2e基因融合到VP2基因的BC區或羧基端。

所說的VP2基因的BC區融合1拷貝的M2e基因。

所說的VP2基因的羧基端融合4拷貝的M2e基因。

重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗的構建方法，先將H5或H9亞型禽流感病毒的M2e基因融合到雞傳染性法氏囊病毒VP2基因形成重組基因，再將重組基因克隆到大腸桿菌原核表達系統或pFast-Bac-1桿狀病毒真核表達系統中表達獲得重組表達質粒，并經發酵培養制備重組疫苗。

重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗在制備防治禽流感病毒和雞傳染性法氏囊病毒藥物中的應用。

含有重組禽流感M2e的雞傳染性法氏囊VP2亞單位疫苗的組合物。

本發明具有如下技術效果：