[發明專利]一種檢測植物中目標基因的方法及其專用SPR生物傳感器

無效

• 申請號: 201110100899.0
• 申請日: 2011-04-21
• 公開（公告）號: CN102181555A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 麻密;趙卓亞;徐文忠;何振艷;陳焱山
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種輔助檢測或檢測待測生物中目標基因的方法，包括如下步驟：

1)提取待測生物的基因組DNA作為模板，以如下權利要求5或6所述試劑中的所述引物對作為引物，進行PCR擴增，得到PCR產物；

2)將步驟1)得到的PCR產物變性為單鏈DNA分子；

3)將步驟2)得到的單鏈DNA分子流經如下權利要求7或8所述的SPR生物傳感器的傳感芯片，若檢測的RU值發生改變，則所述待測植物中候選含有或含有目標基因，若檢測的RU值未發生變化，則所述待測植物中候選不含有或不含有目標基因。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述生物為植物；所述目標基因為抗蟲蛋白的編碼基因。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述植物為轉入所述目標基因的植物；

所述抗蟲蛋白的編碼基因為Cry1Ac；

所述Cry1Ac的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列1。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在所述步驟1)后和所述步驟2)前，還依次包括純化所述PCR產物和緩沖處理所述PCR產物的步驟；

所述緩沖處理PCR產物包括如下步驟：將所述純化得到的純化后PCR產物與PH值為7.4的PBM緩沖液混勻，得到緩沖處理后PCR產物；

步驟2)中，所述變性采用的溫度為100℃，所述變性采用的時間為5min；

步驟3)中，所述流經的速度為5μl/min，所述流經的溫度為25℃，所述流經的時間為4min。

5.一種用于輔助檢測待測生物中目標基因的試劑，由探針和用于擴增所述探針的引物對組成，

所述探針為滿足如下1)和2)條件的單鏈DNA分子：

1)不存在發夾結構和二聚體；

2)與所述目標基因的核苷酸序列的同一性大于90％。

6.根據權利要求5所述的試劑，其特征在于：

所述探針的大小為25nt；

所述探針的5′端標記生物素；

所述探針的核苷酸序列為序列表中序列1；

所述用于擴增所述探針的引物對中的一條引物為序列表中的序列2，另一條引物為序列表中的序列3。

7.一種用于輔助檢測待測生物中目標基因的SPR生物傳感器，為將權利要求5或6所述試劑中的所述探針以共價結合的方式偶聯到傳感芯片上，得到SPR生物傳感器。

8.根據權利要求7所述的生物傳感器，其特征在于：

所述傳感芯片為SA芯片；

所述目標基因為Cry1Ac基因；

所述偶聯包括如下步驟：將含有所述探針的溶液流經活化后的SA芯片，使其與SA芯片表面結合，得到SPR生物傳感器：

所述含有所述探針的溶液為將所述探針和PH為7.4的PBM緩沖液混合，得到的溶液，所述探針在所述含有所述探針的溶液中的濃度為1μM；

所述流經的流速為10μl/min；

所述流經的時間為128s；

所述生物為植物，所述植物具體為棉花。

9.權利要求7或8所述SPR生物傳感器在輔助檢測生物中目標基因中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述生物為植物；所述目標基因為抗蟲蛋白的編碼基因；

所述植物為轉入所述目標基因的植物；

所述抗蟲蛋白的編碼基因為Cry1Ac；

所述Cry1Ac的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列1。