[發明專利]一種結核桿菌候選抗原及其應用

有效

• 申請號: 201110100378.5
• 申請日: 2011-04-20
• 公開（公告）號: CN102747048A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 郗雪艷;趙振東;何維
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院病原生物學研究所
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N5/0783;A61K39/04;A61P31/06;C12R1/32
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種結核桿菌候選抗原及其應用。

背景技術

γδT細胞由于在抗結核免疫中發揮重要的作用引起越來越多的關注，磷酸抗原被認為是γδT細胞識別的主要抗原，但磷酸抗原活化的γδT細胞缺乏對結核桿菌有效的免疫保護。相比而言，結核桿菌的蛋白抗原有著更有效的免疫保護作用。一直以來，研究者采取不同的方法獲取γδT細胞識別的結核桿菌的蛋白抗原，早期的方法是通過不同的方式處理結核桿菌，通過質譜分析活化γδT細胞的蛋白成分，粗略地鑒定出活化γδT細胞的結核蛋白抗原成分集中在10-14KD的范圍內。但應用此種方法并沒有得到特定的結核抗原成分。Alderson的課題組以結核病人的抗血清和結核桿菌反應性的CD4⁺T淋巴細胞為探針，通過篩選結核桿菌的基因表達文庫中發現了與之發生特異性結合的抗原表位，為獲得有效的結核亞單位疫苗奠定了基礎。但到目前為止，以γδT淋巴細胞為探針釣取抗原表位的研究未見報道。

由于分離得到的結核病人外周血γδT細胞在體外存活時間較短，如果沒有其他細胞因子和抗γδTCR抗體的刺激作用僅能存活2周左右，不能滿足篩選文庫的需要，因此如能夠在體外建立結核特異性γδT細胞系，作為釣取抗原表位的探針，將能夠滿足篩選γδT細胞識別的結核桿菌抗原表位的需要。缺陷型T淋巴瘤細胞系J.RT3-T3.5細胞恰恰能夠滿足這種需要，此種細胞系不表達有功能的TCR，但可接受外源的TCR鏈，形成有功能的均一化的γδTCR轉染細胞系。此種細胞系在外源抗原的刺激下，活化表達IL-2。

因此，根據轉染細胞系IL-2的分泌情況，可以判斷γδT細胞對相應抗原的識別及在γδTCR識別抗原的過程中，關鍵的識別位點(Xi?XY，et?al.2009.J.Bio.Chem.284：27449-27455.Xi?XY，et?al.2010.International?Immunology?22：299-306.)。但以γδTCR轉染細胞系為探針，篩選文庫的研究未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種多肽及其應用，可以用來作為結核桿菌蛋白抗原的候選表位肽。

本發明提供的多肽，是具有如下氨基酸殘基序列之一的多肽：

(a)由序列表中序列5所示的氨基酸序列組成的多肽；

(b)將序列表中序列5所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由(a)衍生的多肽。

所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

編碼所述多肽的基因也是本發明保護的范圍。

所述基因是如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列6所示的DNA分子；

(2)在嚴格條件下與(1)限定的DNA序列雜交且編碼具有相同功能的多肽的DNA分子；

(3)與(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且編碼具有相同功能的多肽的DNA分子。

含有所述基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也是本發明保護的范圍。

所述多肽或所述基因或所述的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌在制備促進γδT細胞分泌IL-2的促進劑中的應用也是本發明保護的范圍。

所述多肽在制備促進γδT細胞的增值的促進劑中的應用也是本發明保護的范圍。

所述多肽在制備結核桿菌疫苗中的應用也是本發明保護的范圍。

所述多肽在制備抗結核桿菌產品中的應用也是本發明保護的范圍。

所述產品為藥物。

本發明的實驗證明，本發明建立了一種篩選γδT細胞識別的結核蛋白抗原的新策略，以體外建立結核反應性γδTCR轉染細胞系為探針在噬菌體隨機文庫中釣取γδTCR識別的結核抗原表位，功能驗證的結果顯示表位TP1是可能的γδT細胞識別的結核表位，為開發新型結核疫苗或佐劑成分提供新的思路。

附圖說明

圖1為構建結核特異性和非特異性γδTCR轉染細胞

圖2為以轉染細胞為探針，篩選噬菌體十二肽庫的操作流程

圖3為優勢表位肽TP1與結核特異性γδTCR轉染細胞的結合能力鑒定