[發明專利]重金屬汞的酶聯免疫吸附測定方法

無效

• 申請號: 201110099400.9
• 申請日: 2011-04-20
• 公開（公告）號: CN102250237A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 周培;奚濤;邢海波;時唯偉;曹成喜
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種重金屬汞完全抗原的合成方法，其特征在于，通過將還原谷胱甘肽與載體蛋白分別溶于pH?7.4的磷酸鹽緩沖液后，谷胱甘肽的羧基端通過交聯劑碳二亞胺鹽酸鹽溶液與大分子載體蛋白牛血清白蛋白或卵清白蛋白的氨基端偶聯，用超濾離心管超濾離心去除未參與反應的小分子化合物，再添加汞離子溶液，汞離子與合成的GSH-載體蛋白大分子中的谷胱甘肽的巰基結合，最終得到含有免疫原Hg-GSH-BSA或包被檢測原Hg-GSH-OVA的重金屬汞離子的完全抗原。

2.根據權利要求1所述的重金屬汞完全抗原的合成方法，其特征是，所述的碳二亞胺鹽酸鹽溶液的濃度為2mg/mL。

3.根據權利要求1所述的重金屬汞完全抗原的合成方法，其特征是，所述的汞離子溶液中Hg²⁺的濃度為2mmol/L。

4.一種重金屬汞完全抗原的多克隆抗體的制備方法，其特征在于，通過將上述任一權利要求所述免疫原Hg-GSH-BSA通過多次反復免疫，純化后制備得到多克隆抗體。

5.根據權利要求4所述的重金屬汞完全抗原的多克隆抗體的制備方法，其特征是，所述的多次反復免疫是指：運用常規多次免疫法免疫，其中第一次免疫使用弗氏完全佐劑與免疫原等體積乳化，從第二次免疫起用弗氏不完全佐劑乳化，最后一次免疫后十天即得多克隆抗體。

6.一種重金屬汞的酶聯免疫吸附測定方法，其特征在于，利用上述任一權利要求所述的免疫原Hg-GSH-BSA制備的多克隆抗體建立間接競爭酶聯免疫吸附測定方法，以檢測水樣中重金屬汞。

7.根據權利要求6所述的重金屬汞的酶聯免疫吸附測定方法，其特征是，所述的建立間接競爭酶聯免疫吸附測定方法，包括以下步驟：

1)前處理：0.5mM?EDTA與標準溶液，即待測樣預混，37℃溫浴1h；

2)包被：包被原用CB緩沖液100μL/孔包被4℃過夜，洗板3次；

3)封閉：200μL/孔5％甘氨酸37℃封閉1h，洗板3次；

4)加樣：將預混好的樣品50μL/孔加入，用PBS稀釋抗體到兩倍工作濃度，50μL/孔加入，振蕩10min，37℃溫浴2h，洗板3次；

5)加酶標二抗；1∶6000倍稀釋的酶標二抗100μL/孔，37℃溫浴1h，洗板3次；

6)顯色：加TMB底物液顯色10min；

7)終止反應：50μL/孔2M硫酸終止反應，450nm下讀取OD值。