[發明專利]流產嗜性衣原體外膜蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201110098276.4
• 申請日: 2011-04-19
• 公開（公告）號: CN102220285A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 何誠;楊君敬;凌勇;潘青;歐長波
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;G01N33/577
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，涉及一種流產嗜性衣原體單克隆抗體及其制備方法與應用，尤其涉及一種流產嗜性衣原體POMP18D?N端蛋白單克隆抗體及其制備方法與應用。

背景技術

流產嗜性衣原體(Chlamydia?abortus，C.abortus)是一大群與革蘭氏陰性菌有密切關系的專性真核細胞內寄生的原核生物，其能引起各種動物和人的感染，對許多國家的畜牧業生產造成巨大的經濟損失和影響公共衛生。流產嗜性衣原體是比較常見的導致母畜流產的病原體，近幾年，邱昌慶等人對目前國內各省份的規模化豬場進行的豬衣原體病的調查顯示，豬衣原體感染總體呈上升趨勢，如1987年四川的感染率為11.45％，1989年為15.52％，2003年上升到80％，給集約化養豬業造成嚴重的經濟損失。

在衣原體診斷方面，目前應用最多抗原的仍然是主要外膜蛋白(MOMP)和脂多糖(LPS)。包括根據ompA基因保守性建立的檢測抗原的多聚酶鏈式反應(PCR)技術，根據檢測LPS特異性建立的直接免疫熒光抗體檢測技術，如英國OXOID公司的衣原體熒光檢測試劑盒，以及放大酶聯免疫吸附實驗(PCE-ELISA)方法。檢測抗體的試劑盒，如以LPS包被的間接熒光試劑盒(以色列Savyon?Diagnostics)，以MOMP為包被抗原的酶聯免疫吸附試劑盒(法國IDVET)抗體檢測試劑盒等。但是PCR技術診斷周期長、適用范圍窄，不利于臨床推廣，而進口抗體檢測試劑盒雖然可信度較高，但成本也高、也不利于臨床普及。

發明內容

本發明的目的是提供一種流產嗜性衣原體外膜蛋白單克隆抗體及其制備方法與應用。

本發明提供的流產嗜性衣原體外膜蛋白單克隆抗體是由雜交瘤細胞株1F10D4產生的，其免疫原為流產嗜性衣原體(C.abortus)外膜蛋白是以POMP18D?N端首段重組蛋白POMP18D-1為免疫原，免疫Balb/c小鼠，然后篩選出的雜交瘤細胞株。本發明提供的雜交瘤細胞株1F10D4，已于2011年03月10號在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區大屯路甲3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)保藏，保藏號為CGMCC?No.4658。

本發明還提供流產嗜性衣原體單克隆抗體的制備方法，其是以流產嗜性衣原體外膜蛋白POMP18D?N端蛋白作為抗原免疫小鼠，免疫后的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合獲得分泌流產嗜性衣原體POMP18D?N端蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，得到流產嗜性衣原體POMP18D?N端蛋白單克隆抗體。

其中，所述的流產嗜性衣原體外膜蛋白POMP18D?N端蛋白為冷凍抽干粉，免疫時用適量的PBS溶液稀釋。

流產嗜性衣原體外膜蛋白POMP18D?N端蛋白，命名為POMP18D-1，為：

1)SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

2)SEQ?ID?No.2的氨基酸序列經過添加標簽序列衍生的蛋白質。

為了使1)的POMP18D-1蛋白質便于純化，可在SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。

表1.標簽序列