[發(fā)明專利]一種動(dòng)物源食品中多種多肽類獸藥殘留量的檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110096739.3
• 申請(qǐng)日: 2011-04-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102236005A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林維宣;孫興權(quán);蔣維旗;董偉峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 林維宣
• 主分類號(hào): G01N30/72
• 分類號(hào): G01N30/72;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/34
• 代理公司: 大連星海專利事務(wù)所 21208
• 代理人: 于忠晶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安全領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種動(dòng)物源食品中多種多肽類獸藥殘留量的檢測(cè)方法，尤其涉及桿菌肽、多粘菌素B、粘桿菌素、維吉尼霉素等四種獸藥殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè)方法。?

背景技術(shù)

多肽類抗生素（peptides）是由多粘桿菌或產(chǎn)氣孢子桿菌的培養(yǎng)液中提取制得。常用的多肽類抗生素有桿菌肽（Bacitracin）、多粘菌素B（Polymyxin?B）、粘桿菌素（Colistin）、維吉尼霉素(Virginiamycin)等。每種多肽類抗生素都是一種含有多種組分的化合物。多肽類抗生素可分別抗革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、綠膿桿菌、真菌、病毒、螺旋體、原蟲(chóng)的感染，對(duì)敗血癥、呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、牛乳腺炎等疾病，小劑量時(shí)抑菌，大劑量時(shí)殺菌，被廣泛用于家禽、豬、牛等的飼料添加劑和獸藥，用來(lái)促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和治療畜禽疾病。?

隨著多肽類抗生素應(yīng)用的增加，人們逐漸發(fā)現(xiàn)其在動(dòng)物體內(nèi)的殘留，可通過(guò)肉、蛋、奶等動(dòng)物源食品傳遞給人類。多肽類抗生素的毒性較大，除對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜損傷外，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞膜也起作用，主要對(duì)腎、神經(jīng)系統(tǒng)有一定毒性。因此，多肽類抗生素在動(dòng)物源產(chǎn)品中的殘留問(wèn)題給人們身體健康帶來(lái)了較大的隱患，

目前，多肽類獸藥殘留量的檢測(cè)方法主要有微生物法、免疫分析法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法和液相色譜-質(zhì)譜等方法。GB/T?20743-2006《豬肉、豬肝和豬腎中桿菌肽殘留量的測(cè)定?液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》公開(kāi)了豬組織中桿菌肽殘留量的檢測(cè)方法；GB/T?22981-2008《牛奶和奶粉中桿菌肽殘留量的測(cè)定?液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》公開(kāi)了牛奶和奶粉中桿菌肽殘留量的檢測(cè)方法；SN0295-93《出口禽肉中桿菌肽殘留量檢驗(yàn)方法?杯碟法》公開(kāi)了禽肉中桿菌肽殘留量檢測(cè)方法；SN0668-1997《出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法?杯碟法》公開(kāi)了肉及肉制品中粘菌素殘留量檢測(cè)方法；?GB/T?20765-2006《豬肝臟、腎臟、肌肉組織中維吉尼霉素M1殘留量的測(cè)定?液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》公開(kāi)了豬組織中維吉尼霉素M1殘留量的檢測(cè)方法；GB/T?22991-2008《牛奶和奶粉中維吉尼霉素殘留量的測(cè)定?液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》公開(kāi)了牛奶和奶粉中維吉尼霉素殘留量的檢測(cè)方法；SN/T1134-2002《進(jìn)出口肉及肉制品中維吉尼霉素殘留量檢驗(yàn)方法?杯碟法》公開(kāi)了肉及肉制品中維吉尼霉素殘留量檢測(cè)方法。

上述多肽類獸藥殘留分析方法中，大多只限于單個(gè)抗生素殘留量的檢測(cè)，且前處理方法繁瑣。本發(fā)明旨在利用LC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)，建立一種可同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源食品中桿菌肽A、粘桿菌素、多粘菌素B、維吉尼霉素M1等多種多肽類抗生素殘留量檢測(cè)和確證方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有不足問(wèn)題，提供一種液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物源食品中多種多肽類獸藥殘留量的方法，可方便、準(zhǔn)確、高效地同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源食品中桿菌肽、多粘菌素B、粘桿菌素、維吉尼霉素等四種獸藥殘留量。?

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：一種動(dòng)物源食品中多種多肽類獸藥殘留量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1、樣品提?。?/p>

（1）稱取已切碎的肌肉、腎臟或肝臟樣品1.0～3.0?g于50mL具帽離心管中，加入適量無(wú)水硫酸鈉，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9?500?rpm均質(zhì)?2?min后，4℃下8?500?rpm離心10?min。上清液經(jīng)快速定量濾紙轉(zhuǎn)移至另一離心管。殘?jiān)屑尤胩崛∫撼曁崛?0?min，振蕩提取10?min，4℃下8?500?rpm離心10?min，上清液經(jīng)快速定量濾紙轉(zhuǎn)移至同一離心管（合并兩次提取上清液），待脫脂。

（2）乳樣品：稱取牛奶樣品1～3.0?g于50mL具帽離心管中，加入適量無(wú)水硫酸鈉和0.5～1.5?mL鹽酸溶液，渦旋1?min后再加入20～30?mL提取液，超聲提取10?min，振蕩提取10?min，然后4℃下8?500?rpm離心10?min。上清液經(jīng)快速定量濾紙過(guò)濾于另一離心管，待脫脂。

2、提取液脫脂

向上步所得提取上清液離心管中加入正己烷5～15mL，渦旋2?min，4℃下6?000?rpm離心5?min。去掉上層（正己烷層）液，得下層液待固相萃取柱凈化。

3、固相萃取柱凈化