[發明專利]一種利用表面等離子共振生物傳感器的生物檢測方法

有效

• 申請號: 201110093764.6
• 申請日: 2011-04-14
• 公開（公告）號: CN102735653A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 宋爐勝;朱勁松
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N21/55
• 分類號: G01N21/55;C12Q1/68
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 王勇

1.一種利用表面等離子共振生物傳感器的生物檢測方法，包括下列步驟：

1)用催化劑標記待測樣品，所述催化劑對應于所要識別的目標核酸或者目標蛋白質；

2)將用所屬催化劑標記的待測樣品與SPR表面固定的探針結合；

3)在SPR表面的樣品池中通入對應于所述催化劑的底物，所述對應于所述催化劑的底物是能夠與所述催化劑結合并產生氣體的液體；

4)檢測經氣泡放大的所述SPR表面的SPR特征參數的變化。

2.根據權利要求1所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1)中，所述待測樣品為核酸，催化劑標記核酸的方法包括：

1.1)通過寡核苷酸接頭實現對核酸的標記；

1.2)或者通過引物實現對產物核酸的標記；

1.3)或者直接對核酸實現的標記。

3.根據權利要求2所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1.1)中通過寡核苷酸接頭實現對核酸的標記方法的步驟包括：

1.1.1)制備催化劑溶液；

1.1.2)將催化劑溶液與寡核苷酸混合，比例為1-100∶1，反應獲得含有催化劑的寡核苷酸接頭；

1.1.3)提取需要標記的DNA，通過去磷酸化去除DNA的5’端的磷酸基團，防止其自身連接；

1.1.4)在連接酶的作用下，結合催化劑標記的寡核苷酸接頭，獲得催化劑標記的DNA。

4.根據權利要求2所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1.2)中通過引物實現對核酸的標記方法中，采用通過PCR反應引物實現對產物DNA的標記的方法的步驟包括：

1.2.1)制備催化劑溶液；

1.2.2)將催化劑溶液與PCR引物混合，比例為1-100∶1，反應獲得含有催化劑的PCR引物；

1.2.3)利用該標記的引物進行PCR反應，獲得催化劑標記的DNA。

5.根據權利要求2所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1.2)中通過引物實現對核酸的標記方法中，采用通過RT-PCR反應引物實現對產物DNA的標記的方法的步驟包括：

1.2.1)制備催化劑溶液；

1.2.2)將催化劑溶液與RT-PCR引物混合，比例為1-100∶1，反應獲得含有催化劑的RT-PCR引物；

1.2.3)利用該標記的引物進行RT-PCR反應，獲得催化劑標記的DNA。

6.根據權利要求2所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1.3)中采用直接對核酸實現標記的方法為：通過與核酸末端基團反應，從而使核酸末端修飾有氨基，羧基，含硫或者含二酰亞胺類等化合物，該類化合物可以和催化劑中的酶，或者納米顆粒作用，從而實現對催化劑的標記。

7.根據權利要求2所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟2)中將標記的核酸與SPR表面固定的探針結合的方法步驟為：

2.1)對催化劑修飾的核酸進行變性處理；

2.2)將變性處理的催化劑修飾的DNA加到SPR芯片的表面，進行雜交反應；

2.3)清洗除去未雜交結合的催化劑標記的DNA；

2.4)干燥處理備用。

8.根據權利要求1所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟1.3)中，所述待測樣品為蛋白質，催化劑標記蛋白質的方法步驟為：

1.3.1)制備催化劑溶液；

1.3.2)將催化劑溶液與還原處理的蛋白質以不低于5∶1的比例混合，反應獲得含有催化劑的蛋白質。

9.根據權利要求8所述的生物檢測方法，其特征在于，上述步驟2)中將標記的蛋白質與SPR表面固定的探針結合的方法步驟為：

2.1)PBS處理生物芯片；

2.2)將催化劑修飾的蛋白質加到SPR芯片的表面，進行結合反應；

2.3)清洗除去未結合的催化劑標記的蛋白質；

2.4)干燥處理備用。