[發(fā)明專利]一種重組的HSV擴(kuò)增子載體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110093677.0
• 申請日: 2011-04-14
• 公開（公告）號: CN102212559A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓志強(qiáng);孫項(xiàng)東
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州威瑞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/869
• 分類號: C12N15/869;A61K48/00;A61P35/00;A61P31/22
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種重組的HSV擴(kuò)增子載體，其特征在于，該載體是由分別攜帶Cre重組酶表達(dá)盒和操作性相連元件“l(fā)oxP-HSV復(fù)制元件oriS-包裝信號pac-轉(zhuǎn)基因表達(dá)盒-LoxP”的兩種復(fù)制缺陷型腺病毒在共感染細(xì)胞內(nèi)重組而成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體，其特征在于，所述的攜帶Cre重組酶表達(dá)盒的復(fù)制缺陷型腺病毒是將操作性相連元件SV40啟動子-Cre重組酶編碼序列-PolyA元件重組入AD5復(fù)制缺陷型腺病毒載體構(gòu)建而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體，其特征在于，所述的復(fù)制缺陷型腺病毒攜帶的操作性相連元件的“HSV復(fù)制元件oriS-包裝信號pac-轉(zhuǎn)基因表達(dá)盒”位于2個loxP序列之間，且2個loxP的序列是同向的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體，其特征在于，所述的復(fù)制元件oriS的序列如SEQ?ID?NO:?2所示；或所述的復(fù)制元件oriS序列通過如下方法獲得：MluI酶切BAC-HSV-1-HF獲得含末端重復(fù)區(qū)的BAC-TR，然后NotI酶切BAC-TR獲得含oriS及其側(cè)翼序列的片段，再用AgeI酶切前述片段后獲得含oriS核心區(qū)及其側(cè)翼序列的片段，最后經(jīng)NcoI酶切獲得1.2Kb的含88bp?oriS核心區(qū)及其側(cè)翼序列的片段作為復(fù)制元件oriS的序列；

所述的包裝信號pac的序列如SEQ?ID?NO:?3所示；或所述的包裝信號pac通過如下方法獲得：MluI酶酶切BAC-HSV-1HF，獲得含末端重復(fù)區(qū)的BAC-TR，然后SacI酶切BAC-TR獲得含HSV-1末端重復(fù)區(qū)“pac”序列的片段；再用HphI酶切前述片段獲得含末端重復(fù)區(qū)“pac”序列的片段；最后BsrBI酶切前一片段后獲得含188bp?Ub-DR1-Uc結(jié)構(gòu)的片段，作為包裝信號pac的序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體，其特征在于，所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)盒選自目的基因表達(dá)盒，報告基因表達(dá)盒，靶基因microRNA表達(dá)盒，和靶基因shRNA表達(dá)盒。

6.一種如權(quán)利要求1所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體的用途，其特征在于，所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體在制備靶向溶腫瘤/抗腫瘤的基因制劑中的應(yīng)用。

7.一種如權(quán)利要求1所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體的用途，其特征在于，所述的重組的HSV擴(kuò)增子載體用于制備抗HSV感染及HSV感染相關(guān)疾病的制劑。