[發(fā)明專利]一種RNA吸附材料及制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110087430.8
• 申請(qǐng)日: 2011-04-08
• 公開（公告）號(hào): CN102151545A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳心丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳心丹
• 主分類號(hào): B01J20/12
• 分類號(hào): B01J20/12;B01J20/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明涉及一種RNA吸附材料及使用方法，具體是用酸處理過的坡縷石在酸性環(huán)境來吸附RNA；當(dāng)溶液處于中性環(huán)境中時(shí)釋放吸附的RNA。

技術(shù)背景：

對(duì)生物樣品進(jìn)行RNA分析的時(shí)，需要進(jìn)行RNA提取、RNA純化、RNA擴(kuò)增等。如何保證RNA的完整性、純度對(duì)于RNA的分析至關(guān)重要。

目前常用的RNA吸附材料有：(1)表面偶聯(lián)有二乙胺乙醇(DEAE)的親水性樹脂，該樹脂依靠表面DEAE所帶正電荷，吸附帶負(fù)電荷RNA。(2)磁珠；該吸附材料以磁珠為載體，依靠表面羧基化的表面來吸附RNA，而磁珠使得吸附的RNA易于分離出來。(3)其他的硅膠、玻璃等吸附材料也是依靠類似的原理進(jìn)行RNA吸附。

但是上述這些材料表面親水性強(qiáng)，極易吸附蛋白，糖類，RNA等水容物，從而使這些吸附材料經(jīng)幾次循環(huán)后吸附過多雜質(zhì)，影響了表面吸附RNA的能力，同時(shí)雜質(zhì)阻塞樹脂間隙，使液體流過柱子的速度明顯變慢，二是偶連基團(tuán)與樹脂的偶聯(lián)并不十分穩(wěn)定，在一經(jīng)使用后的液體環(huán)境中，容易逐步解離。

坡縷石是一種層鏈狀結(jié)構(gòu)的含水富鎂鋁硅酸鹽黏土礦物，1862年因首次發(fā)現(xiàn)于蘇聯(lián)的烏拉克地區(qū)(坡縷高斯克)而得名。它因質(zhì)地輕柔，具有較強(qiáng)的吸附性能，坡縷石的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)式為Mg5(H2O)4[Si4O10]2(OH)2。坡縷石的比表面積達(dá)372m²/g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于活化氧化鋁、硅藻土、固體硅膠等常用的固體吸附劑。這是因?yàn)槠驴|石晶形結(jié)構(gòu)中有許多管狀貫穿通道，可吸附多種極性與非極性分子物質(zhì)進(jìn)入貫穿通道之中，具有很強(qiáng)的吸附力。目前坡縷石已經(jīng)被廣泛用于吸附黃酒中的懸浮沉淀。

此外，坡縷石還具有很強(qiáng)的酸、堿和熱穩(wěn)定性。有試驗(yàn)表明將坡縷石分別浸泡在10％的鹽酸和10％的NaOH溶液中，放置48小時(shí)后觀察，材料膨脹，但不溶解。將坡縷石分別置于丙酮、乙醚、四氯化碳、乙酸乙酯、汽油等有機(jī)溶劑中浸泡48小時(shí)，材料仍無變化。實(shí)驗(yàn)表明，坡縷石對(duì)酸、堿、及有機(jī)溶劑皆有惰性，化學(xué)穩(wěn)定性好。將天然坡縷石置于800℃的高溫爐中灼燒4小時(shí)，材料無變化，仍具柔軟性。當(dāng)溫度升至1000℃以上時(shí)，材料開始發(fā)硬，仍具白色。說明坡縷石具有很好的熱穩(wěn)定性。

上述性質(zhì)表明一方面坡縷石良好的吸附性能可以用于RNA等核酸的吸附，另一方面也表明坡縷石作為一種吸附材料具有極強(qiáng)的穩(wěn)定性，可以反復(fù)循環(huán)使用。

本發(fā)明正是利用坡縷石經(jīng)酸處理后晶體產(chǎn)生的孔道所具有的吸附能力從而達(dá)吸附RNA的目的。

發(fā)明內(nèi)容：

1、本發(fā)明公開了一種新的RNA吸附材料及使用方法。該方法具體如下：天然的坡縷石礦產(chǎn)洗滌、烘干、粉碎后用5.0mol/L鹽酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃處理1.5小時(shí)；處理后于120℃烘干。

將烘干后的坡縷石粉末加入pH為3.5-4.5的RNA溶液中，振蕩、混勻后，坡縷石可吸附溶液中RNA；吸附后RNA的坡縷石加入pH為7.0-8.0的溶液中后可釋放RNA。

本發(fā)明通過以下途徑實(shí)現(xiàn)：

1、將坡縷石粉末用95％的乙醇溶液中浸泡48小時(shí)，浸泡后，材料不溶解，不開裂，分散性能增加；再將坡縷石粉末置于5.0mol/L鹽酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃處理1.5小時(shí)，120攝氏度烘干。

2、將坡縷石粉末加入RNA溶液中，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值，使pH值3.5-4.5，反應(yīng)溫度為室溫。

3、振蕩90秒，讓RNA與坡縷石粉末相結(jié)合。

4、12000rpm離心5分鐘，棄上清。

5、加入pH為7.7-8.0水或低鹽溶液，振蕩15秒，RNA重新釋放到溶液中。

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明：

實(shí)施例1坡縷石的RNA吸附性能

取20mg坡縷石粉末加入1.5ml離心管中，加入1ml?95％的乙醇溶液，振蕩混勻后浸泡48小時(shí)；浸泡后12000rpm離心，棄上清，常溫下涼干。涼干后再將坡縷石粉末置于5.0mol/L鹽酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃處理1.5小時(shí)，120攝氏度烘干。