[發(fā)明專利]以粘蛋白1和生存素為靶點的腫瘤基因工程疫苗

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110086366.1
• 申請日: 2011-04-07
• 公開（公告）號: CN102732543A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設計）人: 孔維;張海紅;于湘暉;于永慧;王玉倩;張麗星
• 申請（專利權）人: 長春百克生物科技股份公司;吉林大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

技術領域

本發(fā)明涉及腫瘤DNA疫苗、病毒載體疫苗及蛋白疫苗領域。具體地說，本發(fā)明涉及重組DNA載體CpVR-MS和CpDV-IL2-MS；重組蛋白疫苗S8和9M以及DNA疫苗、病毒載體疫苗、蛋白疫苗以及這三種形式疫苗之間免疫方式的優(yōu)化組合在制備抗腫瘤疫苗中的用途。

背景技術

生存素(survivin)是抑制凋亡蛋白(IAP)家族成員，具有抗凋亡和調控細胞分裂的雙重功能，廣泛表達于各種胚胎組織和癌細胞中，但在正常終末分化細胞中不表達。這些特點使生存素成為腫瘤發(fā)生，發(fā)展和治療等領域中的一個新靶點。

目前的研究表明生存素在腫瘤基因治療中具有潛在價值：它的腫瘤特異性表達，及其與預后不良、藥物抗性和病人生存期縮短等呈正相關。針對生存素及其突變體等進行的腫瘤免疫治療已成為人們關注的熱點。目前國內外策略有(參見Li，F(xiàn)，et?al.，2006；Li，F(xiàn).，2003；Altieri，D.C.，2008)：(1)利用生存素啟動子的腫瘤特異性表達進行的腫瘤靶向基因治療；(2)針對生存素本身的治療策略：a)生存素的反義或全長的cDNA或反義核苷酸表達載體策略，比較適合生存素的功能研究和前臨床研究，但用全長的生存素可能有潛在的危險；b)生存素功能陰性突變體(dominant?negative?mutant，DNM)策略，主要是SurvT34A和SurvC84A，但此方案可能不適用于直接的癌癥治療；c)生存素核酶方案，即用生存素mRNA特異性核酶剪切生存素mRNA以降低生存素的表達，此方案也是一種有效的研究工具，但不適用于癌癥臨床治療；d)生存素RNAi技術，目前的研究表明：RNAi能有效的使哺乳動物基因表達沉默，可用于基因功能研究，但昂貴的費用限制其臨床應用；e)用小分子有機物或小肽抑制生存素的表達或干擾其功能；f)用生存素特異性表位的免疫治療，這是一個很吸引人的領域，但只用生存素的小肽，免疫原性可能不高。

因為生存素具有抗凋亡的功能，如果用其全長來設計疫苗可能存在安全隱患，根據國內外策略的優(yōu)點和弊端擬采用生存素抗凋亡功能缺失剪切體來設計疫苗，在保證其抗凋亡功能缺失的情況下盡量保存長度以提高免疫原性。因此本發(fā)明采用生存素的抗凋亡功能缺失剪切體來設計疫苗。生存素在體內是以二聚體形式起作用的，它N-端第6、第7和第10位的三個氨基酸是形成二聚體的關鍵氨基酸(參見Shi，Y.et?al.，2000)；生存素的第5位至第14位氨基酸是HLA-A2的特異性抗原表位(參見Andersen，M.H.et?al.，2001)，基于這兩點本發(fā)明首次設計了剪切體S8(即切去生存素N-端7個氨基酸)，希望可以破環(huán)它的二聚體結構，從而使其缺失抗凋亡的功能。因此以S8為靶點來設計疫苗可能會提高疫苗的安全性。

粘蛋白1(MUC1)是粘蛋白家族成員，是跨膜糖蛋白，存在于正常腺管上皮細胞及其來源的腫瘤細胞表面，由多肽核心和側枝糖鏈構成。其核心肽胞外段含有數(shù)目不等的串聯(lián)重復區(qū)(VNTR)。正常組織中MUC1分布于腺管上皮細胞分泌極，與免疫細胞相對隔離，糖基化豐富；而在腫瘤組織，其廣泛分布并異常豐富地表達于細胞表面，糖基化不完全，因此暴露出正常情況下隱蔽的表位，成為免疫細胞攻擊的靶點，并且表達增強，可達正常細胞的100倍以上，因此MUC1是較理想的抗腫瘤靶分子。

MUC1VNTR中的PDTRP序列是B細胞及T細胞共同識別的表位，可與MUC1特異性抗體及細胞毒性T淋巴細胞(CTL)相結合，故稱這個最具免疫原性的部位為免疫顯性結構域，因此，目前大部分利用MUC1研究免疫治療的都是集中在VNTR區(qū)域(參見Singh，R.et?al.，2007；Persson，J.et?al.，2006；Xing，P.X.et?al.，1992；Tang，C.K.et?al.，2008；Tang，C.K.et?al.，2008)。從發(fā)現(xiàn)MUC1到現(xiàn)在已用其進行了很多的疫苗研究工作，并有一些疫苗已經進入人類臨床研究階段，但大多數(shù)都是傳統(tǒng)的多肽類、蛋白類或樹突狀細胞(DC)類疫苗，這些疫苗大多都存在免疫原性差或制備困難等問題；進入臨床的基因疫苗主要是重組痘病毒疫苗，雖然沒有檢測到毒性，但直接用重組痘病毒疫苗初免-加強還是存在較大的安全隱患，而且產生的臨床效果也不是很理想；DNA載體疫苗由于免疫原性較弱目前還基本處于臨床前研究階段。