[發(fā)明專利]一種齒肋赤蘚原絲體的培養(yǎng)與保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110084559.3
• 申請(qǐng)日: 2011-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN102257954A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)?/a>;張丙昌;王敬竹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01N3/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種齒肋赤蘚原絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的具體培養(yǎng)步驟包括：

(1)材料選擇與處理：在古爾班通古特沙漠選擇以齒肋赤蘚為建群種發(fā)育良好的蘚類結(jié)皮斑塊，挑選一些生長(zhǎng)健壯的齒肋赤蘚植株；先用自來(lái)水沖洗干凈，再用無(wú)菌蒸餾水反復(fù)沖洗；在無(wú)菌操作臺(tái)將清洗干凈的苔蘚植株在70％的酒精浸泡消毒20s，取出后再用無(wú)菌蒸餾水沖洗3-4次；將清洗干凈的苔蘚植株置于無(wú)菌操作臺(tái)上用無(wú)菌風(fēng)自然風(fēng)干；在已滅菌的研缽內(nèi)，將風(fēng)干的苔蘚植株輕微研磨成碎片待用；

(2)接種與培養(yǎng)：將上述步驟獲得的苔蘚碎片用無(wú)菌蒸餾水稀釋，然后接種在盛有BG₁₁固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，用parafilm封口膜封口；將培養(yǎng)皿置于光照培養(yǎng)箱中，溫度22℃，采用光照強(qiáng)度27μmol·m^-2·s^-1，光照條件和黑暗條件分別為14h、10h，而且為兩者交替進(jìn)行；培養(yǎng)3周后，苔蘚碎片上開始長(zhǎng)出原絲體，再過10d后在無(wú)菌操作臺(tái)上收集苔蘚原絲體；

(3)擴(kuò)大培養(yǎng)：將上述制備獲得的苔蘚原絲體轉(zhuǎn)入裝有BG₁₁液體培養(yǎng)基的200ml培養(yǎng)瓶中，BG₁₁培養(yǎng)基中添加2％W/W的蔗糖，溫度22℃，光照強(qiáng)度27μmol·m^-2·s^-1；培養(yǎng)3-4周后，再次將原絲體轉(zhuǎn)入10L大培養(yǎng)瓶中，液體培養(yǎng)基5-6L，通氣培養(yǎng)，通氣量為5L·h^-1，其它培養(yǎng)條件不變，培養(yǎng)一個(gè)月可采收。

2.一種如權(quán)利要求1所述齒肋赤蘚原絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的在制備BG₁₁固體培養(yǎng)基瓊脂粉添加量為15g·L^-1，121℃滅菌30min，然后將培養(yǎng)基倒入直徑為90mm的培養(yǎng)皿中。

3.一種如權(quán)利要求1或2任意所述齒肋赤蘚原絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的BG₁₁固體培養(yǎng)基，每升BG₁₁培養(yǎng)基組分含有：硝酸鈉1.5g，，磷酸氫二鉀0.04g，硫酸鎂0.07g，氯化鈣0.036g，檸檬酸0.006g，檸檬酸鐵胺0.006g，乙二胺四乙酸鈉鹽0.001g，碳酸鈉0.02g，微量元素A₅溶液1mL，瓊脂粉添加量為15g·L^-1，其中，A₅溶液組分按照每升重蒸水中加入H₃BO₃?2.86g，MnCl₂.4H₂O?1.86g，ZnSO₄·7H₂O?0.22g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.39g，CuSO₄·5H₂O?0.08g，Co(NO₃)₂·6H₂O?0.05g。

4.一種通過權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法制備獲得齒肋赤蘚原絲體的保存方法，其特征在于，所述的具體培養(yǎng)步驟包括：

(1)將采收的苔蘚原絲體置于陰涼通風(fēng)處風(fēng)干；

(2)風(fēng)干后的苔蘚原絲體置于無(wú)菌封口塑料袋于-40℃冰箱中保存?zhèn)溆茫萌~綠素a的熒光值(Fv/Fm)表示其光合活性，室溫下測(cè)得濃度為2g·L-1的原絲體的熒光值(Fv/Fm)是0.36±0.01。